EL MÉTODO DE BRADFORT
Está basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 (figura 3) en respuesta a diferentes concentraciones de proteínas. Este compuesto interacciona con aminoácidos básicos (especialmente arginina) y aromáticos. Esta unión del colorante con las proteínas provoca un cambio en el máximo de absorción del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, este método se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuando el colorante se une a la proteína. Experimentalmente se mide la diferencia de absorbancias entre 595 y 465 nm (595-465nm).

Figura 3. Estructura química del colorante …ver más…

Tabla 1. Datos para la curva de calibración Tubo | Concentración (mg/mL) | %T | Abs | 1 | 1000 | 8 | 1,097 | 2 | 500 | 12 | 0,921 | 3 | 250 | 16 | 0,796 | 4 | 125 | 20 | 0,699 | 5 | 62,5 | 25 | 0,602 | 6 | 31,2 | 29 | 0,538 | 7 | 15,6 | 31 | 0,509 | 8 | 7,8 | 32 | 0,494 | Blanco | 0 | 34 | 0,468 |

Con los datos obtenidos de Absorvancia y concentración de cada patrón se realizo la respectiva curva de calibración, la cual arrojo un r2=0.905 valor muy cercano a 1, por lo tanto indica que existe una muy buena relación de tipo lineal entre la concentración y la Absorvancia.

Los valores de Transmitancia y Absorvancia de las muestras problema se encuentran en la tabla 2, a partir de estos y de la ecuación dada para la línea (obtenida a partir de la grafica) Y= 1456, X -796.5, podemos calcular las respectivas concentraciones.

Tabla 2. Datos obtenidos para las muestras problema diluidas Tubo | %T | Abs | M1 | 2 | 1,699 | M2 | 2 | 1,699 |

Para la muestra 1 y 2: C = 1456(A) – 796.5 donde C es la concentración en mcg/mL A es la Absorvancia de la muestra C = (1456 x (1.699)) – 796.5 C = 1677.2 mcg/mL C = 1.677 mg/L El valor de la Transmitancia es el mismo para las dos muestras es el mismo debido a que no se encuentran lo suficientemente