EFECTOS DE LA SENESCENCIA EN PROTEÍNAS TOTALES Y AZÚCARES REDUCTORES EN TURIONES DE ASPARAGUS OFFICINALIS L.

Antonio Alcántara

RESUMEN

El espárrago verde (Asparagus officinalis L.) sufre cambios metabólicos durante el proceso de senescencia relacionados con la concentración proteínas totales y azúcares reductores presentes en el turión. En el estudio realizado, se han empleado muestras liofilizadas de espárrago diferenciando la zona apical y la zona basal del turión, debido a sus distintos niveles de senescencia. Se cuantificaron clorofilas, proteínas totales y azúcares reductores. Las clorofilas se usaron como indicador de senescencia del tejido, ya que en tejidos senescentes las clorofilas se degradan. Los resultados obtenidos …ver más…

Se echan 1.5 ml más para recoger los restos de precipitado que quedasen pegados al eppendorf y se pasan al tubo de vidrio. Se ponen los tubos en un baño a 100º C durante 3 minutos. Pasado el tiempo, se pasan las muestras a dos tubos eppendorf y se centrifugan durante 5 minutos a máxima velocidad. Se guarda el sobrenadante. Es necesario medir el volumen final de cada muestra para realizar los cálculos posteriores (modificado de Lill et al. 1990).

Cuantificación de proteínas: La cuantificación de proteínas se realiza mediante el método de Bradford. Se mezclan en un tubo de ensayo 1 ml de extracto vegetal y 1 ml de reactivo de Bradford. Se tapa con un parafilm, se agita suavemente y se deja reposar durante 10 minutos. Pasado el tiempo, se mide la absorbancia a 595 nm frente a un blanco apropiado, es decir, un tubo en el que en lugar de muestra se haya añadido agua. Para que las absorbancias entren en el rango de la recta de calibrado, hicimos diluciones 1/20 para las muestras de basal y 1/50 para las de apical. La recta de calibrado se realiza con albúmina de suero bovino (BSA). Para poder usar este método la concentración de proteína debe ser menor a 10 µg/ml, ya que a valores mayores se pierde la linealidad.

Extracción de azúcares: Se pesan 20 mg de extracto vegetal en un tubo de vidrio, por triplicado de la parte apical y de la parte basal. Se añaden 3 ml de metanol 80%, se tapa con parafilm y se calienta en el baño a 80 ºC durante 2 minutos. Pasado el tiempo,