DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL METODO DE BRADFORD Y LOWRY.

INTRODUCCION.
Método de Lowry:
Es un método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer

Este método consta de dos etapas:

1) Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+-proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la proteína, exponiéndose los residuos fenólicos de tirosina que van a …ver más…

¿Cuál es la importancia de este y para que se utiliza? Fc= 1/m = 18.5, La importancia de este valor determina el inverso de la pendiente, lo que proporciona una relación entre los valores medidos y los valores patrón y se utiliza para conocer el porcentaje de error ya sea en aparatos, analista (medición, calibración de equipo, lecturas)
Tabla 3. Curva de calibración de albumina. Método de Bradford Tubo Nº | Cantidad de proteína (μg) | A 595 | Serie ajustada por regresión lineal. | | | Serie a | Serie b | | 1 | 25 | 0.215 | 0.256 | 0.331 | 2 | 50 | 0.406* | 0.429* | 0.421 | 3 | 75 | 0.524* | 0.542 | 0.511 | 4 | 100 | 0.595* | 0.603* | 0.601 | 5 | 125 | 0.683* | 0.697* | 0.691 |
*Datos tomados para la realización de la curva tipo.

Grafica 3. Curva de calibración de albumina. Método de Bradford

Grafica 3. Curva de calibración de albumina. Método de Bradford (serie ajustada)

Método de Bradford: Ecuación de la recta. y = bx + a a= 0.241 b= 0.0036 r= 0.9995 a) Calcule y escriba los valores de la pendiente, la ordenada al origen, y el coeficiente de correlacion; diga como se interpretan para la curva de calibración. a= 0.241 b= 0.0036 r= 0.9995, y refiere a la sensibilidad del método, a es una constante, es decir, que este valor no depende del cambio en la concentración de proteína, siendo un valor de referencia de la curva (blanco), el valor del coeficiente de correlación r refiere a la reproducibilidad de