INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

METODOS DE ANALISIS

“DETERMINACION DE PROTEINAS POR LOS METODOS DE LOWRY Y BRADFORD”

VAZQUEZ BECERRA ALBERTO

5QM1

FUNDAMENTOS:
La determinación de proteínas por el método de Lowry se basa en una reacción colorida transcurrida en 2 etapas. La primera consiste en la formación de un complejo colorido entre al menos 4 enlaces peptidicos de una proteína y cobre en medio alcalino (reacción de Biuret). La segunda es la reducción del acido fosfomolibdico-fosfotungstico por el complejo cobre proteína el cual da finalmente un color azul, de intensidad proporcional a la concentración de la proteína que se lee a 590 nm. El color producido depende del contenido …ver más…

Tubo | A595 | Cantidad de proteína (µg) | 1 | 0.562 | 94.96 | 2 | 0.548 | 92.10 | 3 | 0.530 | 88.43 | 4 | 0.546 | 91.69 | 5 | 0.498 | 81.90 | 6 | 0.536 | 89.653 | 7 | 0.530 | 88.428 | 8 | 0.511 | 84.551 | 9 | 0.494 | 81.081 | 10 | 0.498 | 81.897 |

Media= 87.46
S= 4.86
S2=23.61
CV= 5.55 %
Limites de confianza de la media= 83.98<x<90.93

Tabla 6. Efecto de algunas sustancias no proteicas en el método de Bradford. Tubo | Sustancia | A595 | Cantidad de proteína (µg) | Tipo d e interferencia | 1 | Fenol al 1% | 0.554 | 93.32 | No hay | 2 | Mercaptoetanol al 0.1 % | 0.567 | 95.97 | no hay | 3 | Tris 1M, pH=10 | 0.579 | 98.42 | + | 4 | Urea al 5% | 0.575 | 97.61 | + | 5 | Sulfato de amonio al 3% | 0.570 | 96.54 | No hay |

Comparación de exactitud y precisión de ambos métodos.

Prueba de la F F=22.61/15.44= 1.529 F de tablas= 3.72
Ya que la F calculada fue menor que la F de tablas se concluye que no hay diferencias significativas en cuanto a la precisión de ambos métodos.

Prueba de la t. Tubo | Bradford | Lowry | Diferencia | Di - D | (Di – D)2 | 1 | 94.96 | 61.704 | 33.256 | 8.176 | 66.846976 | 2 | 92.1 | 59.85 | 32.25 | 7.17 | 51.4089 | 3 | 88.43 | 69.44 | 18.99 | -6.09 | 37.0881 | 4 | 91.69 | 56.88 | 34.81 | 9.73 | 94.6729 | 5 | 81.9 | 64.67 | 17.23 | -7.85 | 61.6225 | 6 | 89.653 | 58.37 | 31.283 | 6.203 | 38.477209 | 7 | 88.428 | 59.11 | 29.318 | 4.238 | 17.960644