EFECTO DEL pH Y DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA TRANSAMINASA

RESUMEN

Se evaluó el efecto de la temperatura y del pH sobre la actividad de la Glutamato- oxalacetato transaminasa (GOT). Para ello se extrajo la enzima de alverjas frescas, realizando una pasta de estas con Tris- HCl pH 7,5 y centrifugando durante 10 minutos. Se tomó el sobrenadante y se colocó en un baño de hielo. Luego se tomaron 0,2 mL de este extracto en varios tubos de ensayos y para medir el efecto del pH se realizó la reacción utilizando tris- HCl de pH 7 y 10 e incubando los tubos a 37 ºC durante 30 minutos. De igual forma se tomaron 0,2 mL de la enzima y se colocaron en tres tubos de ensayo incubándolos a 4, 25 y 50 ºC respectivamente, utilizando en …ver más…

Cuando la concentración de iones hidrogeno es muy baja en comparación con la concentración optima, la molécula los cede desapareciendo cargas positivas o apareciendo cargas negativas en su superficie. Ante una concentración elevada de iones hidrogeno, algunos se fijan a la molécula desapareciendo cargas (-) o poniendo cargas (+) que no existían.

Así mismo al cambiar las cargas eléctricas en los residuos de aminoácidos se alteran los lazos de unión dentro de la molécula variando su acomodo tridimensional con recuperación de la actividad de la enzima.

PROCEDIMIENTO

Obtención De La Enzima

Se pesaron 10 gramos de arvejas los cuales se picó y homogenizó con TRIS-HCl 40 mM, pH 7.5. La pasta formada se centrifugó a 3500 rpm, durante 10 minutos. Se tomó el sobrenadante y se repitió la centrifugación hasta que se obtuvo una solución clara, la cual se mantuvo a una temperatura de 4 ºC.

Efecto del pH
Se prepararon la siguiente serie de tubos:

Tabla 1. Reactivos efecto pH | tubo a (pH 7) | tubo b (pH 10) | sustrato | 0.2 | 0.2 | amortiguador pH 5 | 0.8 | ---- | amortiguador pH 10 | ---- | 0.8 | enzima | 0.2 | 0.2 |

Se incubaron los tubos a 37 ºC durante 30 min

Efecto de la temperatura
Se prepararon la siguiente serie de tubos:

Tabla 2. Reactivos efecto temperatura

| TUBO C (4 °C) | TUBO D (25 °C) | TUBO E (50 °C) | sustrato | 0.2 | 0.2 |