Determinación de la actividad enzimática de la fosfatasa alcalina

Objetivos

-Determinación de la actividad enzimática.
-Determinación de los parámetros cinéticos de la enzima.

Introducción

Una de las características más importantes de las enzimas es su especificidad, la cual se puede definir mediante parámetros cinéticos asociados a la velocidad de reacción de una enzima con un sustrato. La actividad enzimática, o la velocidad con que una enzima cataliza la formación de un producto, directamente relacionada tanto con la cantidad de enzima que es utilizada en el tiempo, o lo que es lo mismo la cantidad de sustrato que se va formando. Es por esto que las mediciones de tiempo deben ser muy prolijas, ya …ver más…

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|1/[Sustrato] |1/V |
|617,696 |370618 |
|252,044 |151226 |
|156,514 |93908,6 |
|85,3715 |51222,9 |
|147 |88200,2 |

Gráfico 3: Gráfico representativo de la ecuación de Lineweaver-Burk

[pic]

La ecuación correspondiente a este grafico es: y = 600x – 2,48 Una vez que se obtiene el grafico numero 3, se pueden obtener la velocidad máxima de reacción (Vmax) y la constante de Michaelis (km) de la siguiente forma: • en x = 0 se obtiene Vmax, entonces: [pic]