[pic]RESULTADOS

Protocolo y resultados

1. curva de calibración para la formación de p-nitrofenol:

• preparar 6 tubos con 0, 1, 2, 3, 4 y 5 ml de solución 60 μM de p-nitrofenol. • Llevar cada tubo a un total de 6 ml agregando 0.1 M NaOH. • En calorímetro leer absorbancia a 405 nm. Usa la muestra sin p-nitrofenol como blanco).

|Tubo |p-nitrofenol 60ulM (ml) |Volumen NaOH 0.1 M (ml) |Concentración p-nitrofenol|Absorbancia a 405 nm |
| | | |(umol) | |
|1 |0 |6 |0 |0 …ver más…

• A intervalos de tiempo agregar 0.5 ml de enzima diluída a cada tubo. • Mezclar e inmediatamente remover 1 ml de la reacción (tiempo 0) desde cada mezcla a tubos con 5 ml de NaOH 0.1 M. • Determinar la concentración de producto formado por la curva de calibración y calcular la velocidad de formación de producto.

a) reacción no inhibida (12min)

|Tubo |NPP 25 mM (ml) |Buffer citrato |Agua (ml) |Enzima (ml) |Absorción a 405 nm|NPP |Velocidad |
| | |0.1M pH 5 | | | |(umol) |(umol/min) |
|1 |0.05 |2.0 |2.45 |0.5 |0.121 |0.125 |0.033 |
|2 |0.10 |2.0 |2.40 |0.5 |0.197 |0.250 |0.055 |
|3 |0.20 |2.0 |2.30 |0.5 |0.346 |0.500 |0.096 |
|4 |0.50 |2.0 |2.00 |0.5 |0.628 |1.250 |0.174 |
|5 |1.00