EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA UREASA

Leydi Mariana Cortez Escarraga Cód: 070150602012 Programa de Biología
Anyi Camila Zabala Hernández Cód: 070150302012 Universidad del Tolima

RESULTADOS OBTENIDOS

• Determinación del pH óptimo
Tabla 1. Datos obtenidos para la titulación del amoniaco

Tubo mLHCl blanco mLHCl problema Titulación corregida μmol de urea
1 1,2 15 13,8 690
2 3,7 20 16,3 815

3 1,8 25 23,2 1160

4 3,5 12 8,5 425

5 4,3 12 7,7 385

• Gráfica 1. µmol de urea hidrolizada vs pH

• Tabla 2. Efecto de la concentración del sustrato con la velocidad de la reacción enzimática.

Tubo mLHCl blanco mLHCl problema …ver más…

En contraste, la enzima tuvo su menor actividad en pH básico (10).
Los segmentos de la izquierda y de la derecha de la curva de campana obtenida, en donde la actividad enzimática es menor que en el pH óptimo, representan las curvas de titulación de las cadenas laterales de los residuos de aminoácidos que forman parte del sitio activo de la enzima.
Una molécula de urea al ser hidrolizada produce dos de amoniaco, NH3. Se titula con HCl ya que este acido neutraliza la base que sería el amoniaco, teniendo en cuenta la relación 1: 2 de la reacción se pueden hallar las moles hidrolizadas.
Comparando los resultados de los mililitros gastados de HCl de los tubos problemas y blanco, vemos que a los problemas se le adicionaron más mililitros que a los tubos blanco. Esto sucede ya que a los problemas no se le adiciono HgCl2, que es un inhibidor para la ureasa. Mientras a los blancos si se le adiciono este metal, que inactiva la ureasa. Es decir, que la presencia de HgCl2 hace que se hidrolice menos urea. Para corroborar esto, remitirse a la tabla 1 y comparar los mililitros.
Con la gráfica 2 podemos interpretar que después de cierta cantidad de sustrato la enzima ya no aumenta su velocidad sino que la mantiene constante, esto se debe a que la