LABORATORIO No.2

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD
ENZIMATICA DE LA UREASA

INTRODUCCION

Como el objetivo de nuestra practica es demostrar la actividad enzimática determinando para ello la actividad de la ureasa, por conocimiento sabemos que las enzimas son biocatalizadores específicos de naturaleza proteica que actúan acelerando las reacciones químicas en este caso uno de los factores que afectan esta actividad enzimática es el tiempo de incubación en los tubos 1 y 2 ( con los componentes indicados en cada uno de ellos) quen os permitió expresar esta actividad en términos de velocidad; es decir, la cantidad de producto formado por unidad de tiempo que generalmente se determina en micromoles de producto formado por minuto, teniendo en …ver más…

Extracción de la ureasa

Pese 5g de soya previamente remojada y colóquela en un mortero, adicione 10 mL de NaCl al 1% y triture la mezcla hasta formar una pasta, luego filtre la suspensión con una tela o lienzo y centrifugue durante 5 minutos a 2500 rpm.

Transfiera el sobrenadante a una probeta, adicione al residuo 10 mL de NaCl 1% y repita el procedimiento anterior. Reúna los sobrenadantes y complete hasta 25 mL con solución de NaCl 1%.

2. Determinación del pH óptimo

Preparación de los tubos blanco: A 5 tubos de ensayo, adiciona las cantidades respectivas:
Solución/tubo
1
2
3
4
5
Urea 0.25M
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
Buffer pH = 5 (mL)
4.5
-
-
-
-
Buffer pH = 6 (mL)
-
4.5
-
-
-
Buffer pH = 7.2 (mL)
-
-
4.5
-
-
Buffer pH = 8.0 (mL)
-
-
-
4.5
-
Buffer pH = 10 (mL)
-
-
-
-
4.5
HgCl2 al 1% (gotas)
4
4
4
4
4

Posteriormente Coloque los tubos en un baño a 50 oC., pasados 5 minutos, adicione a cada tubo 0.5 mL de solución de ureasa deje en el baño 25 minutos más. Posteriormente transfiera el contenido de cada tubo a un erlenmeyer diferente, adicione 3 gotas de indicador de tashiro y titule con HCl 0.1N.

Preparación de los tubos problema: Prepare 5 tubos de ensayo de acuerdo a los volúmenes establecidos:

Solución/tubo
1
2
3
4
5
Urea 0.25M
5,0
5,0
5,0
5,0
5,0
Buffer pH = 5 (mL)
4.5
-
-
-
-
Buffer pH = 6 (mL)
-
4.5
-
-
-
Buffer pH = 7.2