Introdução:

As proteínas são compostos orgânicos de alto peso molecular, são formadas pelo encadeamento de aminoácidos. Representam cerca do 50 a 80% do peso seco da célula sendo, portanto, o composto orgânico mais abundante de matéria viva.

A purificação de proteínas é uma série de processos que têm em vista o isolamento de um único tipo de proteínas de uma mistura complexa. A purificação de proteínas é vital para a caracterização da função, estrutura e interações das proteínas de interesse. O material com que se começa é normalmente um tecido biológico ou uma cultura microbiana. Os vários passos do processo de purificação poderão libertar a proteína da matriz que a confina, separar partes proteicas e não proteicas da mistura, e …exibir mais conteúdo…

A ovoalbumina, proteína majoritária do ovo, possui propriedades antigênicas resistentes à desnaturação térmica, é termo-estável.

Objetivo:

O objetivo da pratica foi verificar a eficiência dos diferentes métodos usados para a purificação das proteínas, bem como a identificação e dosagem através do reagente de biureto, ao reagir especificamente com as proteínas. E também observar alguns tipos de desnaturação para entender melhor como funciona esse fenômeno.

Materiais e reagentes:

Bastões de vidro;
Béqueres de 250 mL;
Pipetas graduadas de 2 e 5 mL;
Peneira de plástico;
Tubos de ensaio.
1 ovo;
Leite desnatado;
Água destilada;
Solução de Cloreto de sódio 1M;
Solução saturada de Sulfato de amônio (NH4)2SO4 70% (p/v);
Solução de Ácido clorídrico (HCl) 2%;
Etanol 95%.
Reagente de Biureto

Procedimentos:

Pegou-se um ovo e dele foram separadas a clara da gema de maneira que a membrana que envolve gema não rompesse, em seguida filtrou-se a clara com uma peneira de plástica e a recolhemos em um Becker.
Salting in: em um tubo de ensaio diluiu-se 2 ml da clara de ovo filtrada em 4ml de água destilada, depois foram adicionados gota a gota 6 ml de cloreto de sódio em solução (NaCl) 1M, até a solubilização completa da solução.
Salting out: A solução obtida no experimento anterior adicionou-se 5 ml de solução saturada de sulfeto de amônio [(NH4)2SO4].
Desnaturação (solventes orgânicos): Colocou-se 1 ml da