Transformación de pGLO, Purificación de plásmido, y SDS PAGE
Propósito
1. Aprender la técnica de transformación de la proteína de bacteria E. Coli. Con el gen de GFP. 2. Utilizar el métodos de purificación del DNA del plásmido recombinante contenido en una cepa de la bacteria E. Coli, 3. Familiarizarse con las propiedades de DNA plásmido. 4. Analizar resultado de transformación. 5. Aprender la técnica de cromatografía de columna del plásmido de pGLO. 6. Aprender hacer electroforesis de proteína.
Introducción
La transformación es el método que consiste en la inserción de uno o más genes en el organismo para cambiar la característica del mismo. Esta ocurre cuando una célula incorpora y expresa un nuevo …ver más…

6. Añadieron 50 μL de Lisuenzima 7. Encubaron por 30 minutos a 20 ℃ II. Lisis Bacteria 1. Se descongelo la muestra. 2. Se transfirieron 10 μL al microtubo de 0.5 ml, guardar (L). 3. Centrifugó por 10 minutos a 14,000 rpm. 4. Se Transfirió 250 μL de sobrenadante a un microtubo. 5. Añadió 250 μL de Binding Buffet. 6. Transferir 20 μL a un microtubo guardar (LC). III. Cromatografía 1. Se rotulo de 1-3 tubos. 2. Descanto el Buffet de la columna. 3. Se cargo 250 μL de LC de la columna. 4. Se drenaron en el tubo # 1 (FT) y se guardo 50 μL. 5. Se cargo de la columna con 250 μL WB. 6. Se drenaron en el tubo # 2 y se guardo 50 μL (W). 7. Se cargo 750 μL de TE. 8. Se dreno por completo en el tubo # 3, y se guardo 50 μL (E). 9. Se examinaron los tubos en UV. C. Electroforesis de proteína de SDS PAGE I. Montamos los cristales de electroforesis 1. Se lavaron los cristales con agua y jabón. 2. Se montaron en forma de un “sándwich” los cristales según las instrucciones de la profesora. 3. Se coloco el sándwich en la pieza de acrílico según las instrucciones de la profesora. 4. Se le añadió agua entre los cristales hasta el borde superior y se dejaron así al menos por 5minutos para verificar que no hubieras escapes de líquido entre los cristales y la goma. 5. Después de