Instituto de Ciencias Biomédicas

Laboratorio de Bioquímica

Reacciones proteicas y uso de espectrofotómetro.

Práctica número 4

Objetivo: Identificar proteínas por la presencia de enlaces peptídicos y grupos aromáticos así como cuantificar las mediante la técnica de biuret.

Prerrequisitos
Definir péptidos, polipeptido y proteínas.
Péptidos: son un tipo de moléculas formadas por la unión de varios aminoácidos mediante enlaces peptídicos.
Polipéptido: entre 10 y 100 aminoácidos.
Proteína: más de 100 aminoácidos. Las proteínas con una sola cadena polipeptídica se denominan proteínas monoméricas, mientras que las compuestas de más de una cadena polipeptídica se conocen como proteínas multiméricas. …ver más…

El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Metodología:
En 5 tubos de ensayo se agregaron .5ml de cada una de las sustancias, se les diluyo con agua y se les agrego el reactivo de Biuret .5 ml a todos, se dejó reposar por 10 min.
Tubo Estándar Agua reactivo de Biuret
1. 1 .5ml Peptona .5ml 1ml. a todos
2. 2 .5ml Albumina .5ml
3. 3 .5ml gelatina .5ml
4. 4 .5ml tirosina .5ml
5. 5 1ml.

Resultados: se dieron cambios de color diferentes desde azules claros hasta morados y violetas, todos transparentes y de nuevo se asume que es debido a los diferentes grados de concentración de cada muestra.

Reactivo Biuret:
Metodología:
1. Tomar 1 ml de la solución STD de albúmina (0,1,2,5,10 mg/ml) (5tubos).
2. Tomar 2ml de c/MP
3. Agregar a cada tubo 1 ml del reactivo Biuret.
4. Colocar en reposo por 15 min (esperar el cambio de color)
5. Medir en el espectrofotómetro a ro 595nm utilizando como blanco agua.
6. Con las absorbancias medidas para cada uno de los STDs realizar una curva de calibración que será utilizada para determinar la [] de MPs.

Resultados:
1 .805
2 .562
3 .342
4 .232
5 .163
MP1 .701
MP2 .257
MP3 .414
Resultados: las concentraciones de las sustancias muestras son, MP1.9 , MP2.2 y MP3.4.