Quantificação de proteínas pelo método de Lowry

RESUMO

O método de Lowry tem como objetivo determinar a concentração de proteínas numa solução com o reagente colorimétrico Folin Ciocalteau. Em condições alcalinas esta substância interage com as proteínas da amostra gerando um complexo de cor azul que pode ser medido num espectrofotômetro no comprimento de onda de 750 nm. A técnica é bastante sensível, apresentando várias desvantagens em relação a outros métodos colorimétricos. No experimento realizado, elaborou-se uma curva padrão com albumina de soro bovino (BSA) a 5 mg/mL como solução padrão, onde obteve-se um fator de calibração médio para calcular a concentração de proteínas na amostra. Utilizou-se leite integral diluído para a …exibir mais conteúdo…

Bilirrubina Aumenta a absorção da amostra.
4-metilumbeliferona Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em falso positivo.
Mercaptanas e cisteína Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em falso positivo.
Tampão tris-HCl Reage com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em falso positivo.
Açúcares Reagem com o reativo de Folin-Ciocalteau resultando em falso positivo.
RNA Aumenta a absorção das amostras.

MATERIAIS E MÉTODOS

Materiais e reagentes

- Solução padrão de BSA a 5 mg/mL
- Leite diluído 80 vezes
- Reagente A (5 g/L de sulfato de cobre e 10 g/L de citrato de sódio)
- Reagente B (20 g/L de carbonato de sódio e 4 g/L de hidróxido de sódio)
- Reagente C (1 parte do reagente A e 50 partes do reagente C)
- Reagente D (Folin)
- 1 proveta de 50 mL
- 1 pipeta de vidro de 5 mL
- 2 pipetas de vidro de 1 mL
- 1 micropipeta de 1000 µL
- 1 micropipeta de 200 µL
- 13 tubos de ensaio de vidro
- Espectrofotômetro

Métodos

- Diluímos 1 mL de leite em 79 mL de água
- Preparamos o reagente C com 1 parte do reagente A e 50 partes do reagente B

Observação: Na preparação do reagente C houve um erro de pipetagem, no qual foram adicionados 60 µL de albumina ao reagente. Entretanto, presumiu-se que o reagente tenha sido zerado com o branco.

a) Construção da curva