TEMA 10
Técnicas de marcaje celular. Isótopos radiactivos. Técnica autorradiográfica. Detección de proliferación celular y trazado de vías metabólicas. Uso de bromodesoxiuridina para estudios de proliferación celular. Detección de muerte celular. Criterios morfológicos y afinidad por los colorantes. Técnica del TUNEL. Hibridación in situ de ácidos nucleicos.

Guión:
- Histoautorradiografía.
Isótopos radiactivos.
Interés biológico de los isótopos radiactivos.
Técnicas autorradiográficas.
Aplicaciones biológicas de estas técnicas
1. Estudio de la dinámica y trazado de procesos metabólicos.
2. Estudio de proliferación y seguimiento celular.
- Bromodesoxiuridina en estudios de proliferación celular.
- Detección de muerte …ver más…

electrónico).

Aplicaciones biológicas de esta técnica
1. Dinámica y trazado de procesos metabólicos
-Podemos inyectar una molécula radiactiva un breve periodo de tiempo: PULSO.
-Despues eliminamos la molécula radiactiva y añadimos otras no marcadas: CAPTURA.
-Tomando muestras a diferentes tiempos, veremos el transito de las moléculas marcadas dentro de las células y su incorporación a diferentes vías metabólicas.

Ejemplo: estudiar el camino que siguen las proteínas de secrección.
-La proteína puede ser muy rica en un aminoácido determinado (ej. leucina).
-Marco leucina con tritio radiactivo (3H-leucina) y le doy un pulso a las células.
-Examino varios tiempos de captura.

2. Estudios de proliferación y seguimiento celular
-La timidina es un nucleosido utilizado en la sintesis de ADN.

-Proporcionada a una célula en fase S (replicación del ADN) se incorporará a la cadena naciente de ADN.
-Imaginemos un experimento donde queremos marcar células que estan en proliferación y ver su destino final.
a) Damos un pulso de timidina tritiada a las células.
b) Observamos a diferentes tiempos por autoradiografía cuáles son las células que la han incorporado (en la fase S) y dónde estan.

-Puedo hacer un seguimiento exacto de las células marcadas.
-Puedo determinar de qué otras células son precursoras, etc.
-Importantísimo en estudios de biología del desarrollo. BROMODESOXIURIDINA