Objetivos
• Aprender a utilizar adecuadamente el espectrofotómetro
• Hallar en dos compuestos (DNS y azul de bromofenol) la longitud de onda óptima por medio de sus curvas espectrales.
• Establecer la relación entre la transmitancia y absorbancia con la concentración de una solución.
• Evaluar la veracidad y estabilidad de un espectrofotómetro con una longitud de onda de 500 – 505 nm.
• Relacionar los resultados obtenidos en la práctica de laboratorio con los principios en los que se fundamentan las mediciones espectrofotométricas y los métodos de verificación metrológica de los equipos.

Marco teórico

La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas. El espectrofotómetro es un …ver más…

Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:
1. Dar información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra
2. Indicar indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en la muestra. [2]

Componentes del Espectrofotómetro

Fuente de luz

La misma ilumina la muestra. Debe cumplir con las condiciones de estabilidad, direccionabilidad, distribución de energía espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son lámpara de wolframio o tungsteno, lámpara de arco de xenón.kl y lámpara de Deuterio (D2).

Monocromador

El monocromador aísla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz monocromática. Está constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y salida Es un lente que lleva el haz de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida. Compartimiento de Muestra es donde tiene lugar la interacción, R.E.M con la materia (debe producirse donde no haya absorción ni dispersión de las longitudes de onda). Es