Laboratorio de Bioquímica
Informe n° V , VI
Cinetica y Actividad de β-galactosidasa

Profesor : Gustavo Faúndez Integrantes: Cordero Claudia Corrales Carla Ferraro Valeria
Figueroa Jorge Lara Camila Fecha : 19 Agosto 2013 Sección : 02 Introducción
La β-galactosidasa es una proteína globular con actividad enzimática que se puede encontrar en la naturaleza tanto animal como vegetal y en microorganismos como hongos y bacterias. Además …ver más…

Medir la absorbancia cada 15 - 30 segundos y registrar las lecturas de cada tiempo. Continuar midiendo hasta los 3 minutos (6 mediciones) o hasta que la lectura tienda a estabilizarse

Resultados

Tabla 1. Curva de calibración del o-nitrofenol (ONP).

[ONP] (μM)
Volumen de la solución de ONP 2mM (μL)
Buffer 2x (μL)
Agua destilada
Absorbancia
50
65,61 ml
1250
1187,5
0,194
75
93,75 ml
1250
1156,25
0,251
100
125 ml
1250
1125
0,311
200
250ml
1250
1000
0,686
300
375ml
1250
875
0,868
400
500ml
1250
750
1,195
500
625ml
1250
625
1,455
Blanco
-
1250
1250
0,000

Tabla 2. Determinación de la velocidad de reacción

Volumen de [ONPG] 10 μM (μL)
Buffer 2x (μL)
Agua destilada (μL)
Β-galactosidasa 2mM (μL)
Absorbancia a los (seg)

30
60
90
120
150
180
Tubo 1
225
1250
975
50
0,036
0,062
0,086
0,114
0,140
0,166
Tubo 2
225
1250
925
100
0,98
0,206
0,316
0,420
0,525
0,632
Tubo 3
225
1250
825
200
0,097
0,188
0,279
0,366
0,453
0,538
Blanco
225
1250
1025
-
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000
0,000

Al medir las absorbancias,