Obtención de ADN de Escherichia coli
RESUMEN
Palabras clave:
INTRODUCCION
MATERIALES Y METODOS Los materiales y el procedimiento de la práctica de laboratorio corresponde con el indicado en:
Guía de Laboratorio de Biología Celular y Bioquímica I, obtención de ADN de Escherichia coli; Universidad del Valle, Cali.
Con las modificaciones que se muestran a continuación: en lugar de utilizar 5 ml de solución salina-citrato diluida para el punto 1.2. Extracción y desproteinización del ADN se utilizaron 3 ml. en el punto 3 prueba cuantitativa del ADN extraído no se utilizó 1 ml de solución de ADN de E. coli sino 2 ml y para el punto 2 prueba cualitativa con difenilamida no se preparó el tubo 4, sino que los datos para este tubo fueron …ver más…

(Montenegro, 1999), para el correcto funcionamiento de la enzima fue necesario mantener la reacción a una temperatura de 37 °C y durante 30-40 minutos pues el efecto lítico es casi completo después de ese tiempo y la temperatura es a la cual se encuentra la enzima en su medio natural. (Castro, 2009), luego de romper la pared celular de la bacteria se procedió a agregar dodecil sulfato de sodio (SDS), un detergente usado para solubilizar en parte la membrana externa de las bacterias gram negativas como Escherichia Coli, al separar los lípidos y las proteínas que conforman la membrana celular, lo que produce la liberación del contenido celular de estas: ADN genómico y plasmídico desnaturalizados, ARN y proteínas, el calentamiento a 60°C sirve para optimizar la lisis y no afecta al ADN, ya que este es termoestable además el SDS inactiva las nucleasas, enzimas que hidrolizan las cadenas de ADN