COMPLEMENTO TEÓRICO A LA PRACTICA DE EXTRACCIÓN DE ADN PLASMIDICO

1. Que es un plásmido y que funciones cumplen en Biología Molecular

Los plásmidos son cadenas en su mayoría de ADN cerradas; es decir formando algo parecido a un círculo. También forman una doble hélice, como el ADN de los cromosomas, aunque se encuentran, por definición, fuera de los cromosomas.

Hay algunos plásmidos que tiene la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Digamos que rompe el cromosoma y se sitúa en medio, con lo cual, automáticamente la maquinaria celular también reproduce el plásmido. Cuando ese plásmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Los episomas se utilizan mucho en ingeniería genética por la facilidad con la que se …ver más…

Si la electroforesis se realiza así, sin añadir SDS, se habla de PAGE nativa. El problema se resuelve añadiendo SDS, puesto que al unirse y desplegar la proteína, le proporciona una carga negativa casi uniforme a lo largo de la longitud de la cadena polipéptidica.

b. Buffer de Neutralización que contiene un componente acido

Precipita las proteinas

c. Buffer de Resuspensión

Mantiene la integridad de las celulas, se homogeneizan las células y separan los núcleos de los cuales se extrae el DNA.

d. Identifique cada uno de los anteriores Buffer en nuestro protocolo

• El que tiene un detergentes es la Soluciòn II: NaOH/SDS • El de resuspencion es Soluciòn I: Glucosa/Tris/EDTA (GTE) • El que tiene un acido es la solución III

5. que función tendría la enzima RNAsa A en el protocolo?

Eliminar el RNA que pueda estar contaminando, osea, purificar el DNA

6. Para que se adiciona ampicilina en el medio de cultivo de las Bacterias?

Para que solo crezcan las bacterias que ahora, son resistentes al antibiótico

8. Fuera del método de extracción por Denaturación alcalina que otros métodos existen para extracción de ADN plasmídico?

Las técnicas de Minipreps o mini preparaciones de plasmidos, permiten la recuperación de plasmidos