Extraccion Adn Salting Out
También conocido como cristalización anti disolvente, cristalización precipitación o ahogando en un método para separar proteínas basadas en el principio de que las proteínas son menos solubles a altas concentraciones de sal. La concentración de sal necesaria para la proteína a precipitar difiere de proteína a proteína. * Procedimiento general: La muestra de proteína soluble debe tener una concentración aproximada de 1mg/mL en un buffer que contenga como máximo 50mM de EDTA. Lentamente agregar la solución de sulfato de amonio hasta obtener el porcentaje de saturación deseado, agitar de 10 a 30 minutos. Centrifugar y desechar el sobrante.
Fenol-cloroformo
Permite obtener un ADN libre de …ver más…
Añadir 2.5mL de Cloroformo isoamílico (24:1). 6. Agitar y centrifugar a 2500rpm, por 7 minutos a T° ambiente y descartar la fase superior.
Cromatografía
* Permeación sobre gel: La permeación sobre gel aprovecha las propiedades de las partículas porosas del gel para tamizar moléculas. Se emplea una matriz con poros de tamaño definido, que dejan pasar las moléculas más pequeñas por difusión, pero no las más grandes, que quedan eluidas en el volumen vacío. Así pues, las moléculas quedan eluidas por orden de tamaño decreciente. * Intercambio iónico: La cromatográfica de intercambio iónico es otra técnica, que se basa en la interacción electrostática de la molécula diana con un grupo funcional de la matriz en columna. Los ácidos nucleicos (polianiones lineales con fuerte carga negativa) pueden eluirse de las columnas de intercambio iónico con simples Tampones salinos. * Cromatografía de adsorción: En la cromatografía de adsorción, los ácidos nucleicos se fijan selectivamente en sílice o vidrio, en presencia de determinadas sales (por ejemplo, sales caotrópicas), mientras que otras moléculas biológicas no se fijan. A continuación, los ácidos nucleicos pueden eluirse con agua o un tampón hiposalino y se obtiene una muestra que puede emplearse directamente en las aplicaciones posteriores. http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/capacitybuilding/manuals/Manual%20ES/Sesi%C3%B3n4.pdf Método de Boiling
Solamente utilizable para plásmidos multicopia. El ADN obtenido es