PRÁCTICA 5.- Aislamiento de ARN

PRÁCTICA 5.- Aislamiento de ARN

INTRODUCCION
Una célula típica contiene 10 veces más ARN que ADN. El azúcar presente en el ARN es la ribosa. Esto indica que en la posición 2' del anillo del azúcar hay un grupo hidroxilo (OH) libre. Por este motivo, el ARN es químicamente inestable, de forma que en una disolución acuosa se hidroliza fácilmente. En el ARN la base que se aparea con la A es U, a diferencia del ADN, en el cual la A se aparea con T.

Según las modernas teorías sobre el origen de la vida, parece bastante probable que el ARN fuese el primer biopolímero que apareció en la corteza terrestre durante el transcurso de la evolución.
Se distinguen varios tipos de RNA en función, sobre todo, de …ver más…

La técnica más utilizada fue descrita por Chomczynski and Sacchi en 1987, en la cual el tiocianato de guanidina es extraído utilizando solventes como fenol cloroformo. Lo cual genera una segunda fase orgánica en la cual el DNA y las proteínas son extraídos liberando en RNA en la fase sobrenadante. El RNA puede ser precipitado utilizando Isopropanol y purificado por cromatografía o utilizado como tal para análisis de hibridación tipo Northen Blot, transcripción reversa o transcripción reversa-PCR. (Jiménez, 2011).

Después del aislamiento de la muestras de RNA, la calidad de la preparación aislada del RNA es evaluada por electroforesis en gel de agarosa. Aunque los resultados son principalmente cualitativos, se consigue información de la calidad del material.
Dicho análisis deberá de realizarse en condiciones desnaturalizantes dado que el RNA tiende a formar extensivamente estructuras secundarias, lo cual dificulta su migración.
Un RNA intacto en un gel desnaturalizante deberá observarse como un barrido donde encontraremos las bandas 28S y 18S rRNA (en muestras eucariotas). La subunidad 28S rRNA puede ser aproximadamente el doble de intensa que la 18S rRNA. Este ratio 2:1 (28S:18S) es