FUNDAMENTO:
Las separaciones por intercambio iónico, se lleva a cabo con materiales insolubles y de textura porosa, los cuales presentan grupos reactivos asociados a iones lábiles capaces de intercambiarse con los del medio que les rodea, por lo que inevitablemente este tipo de cromatografía ha de realizarse en medio liquido. La cromatografía de intercambio iónico, es utilizable para la separación de sustancias iónicas, tanto inorgánicas como orgánicas. Las separaciones por cambio iónico, están basadas en los diferentes equilibrios de reparto de los iones de la mezcla entre el material cambiador y la disolución.
OBJETIVOS:
 Emplear la técnica de intercambio iónico para la separación de dos aminoácidos.
 Comprobar la separación …ver más…

Por consiguiente al cambiar el regulador por uno más acido, en este caso regulador de citratos a un pH= 2, la histidina se desprende debido a que hay muchos protones en el medio y la competencia por los sitios activos de la resina se vuelve mayor desplazando así a la hisitidina, por lo que la histidina eluye al final.El mantener un flujo estable y controlado nos va a ayudar a tener una buena separación de los aminoácidos, con una velocidad de elución alta no se lograran separar y es probable que los aminoácidos a separar eluyan juntos, en tanto que una velocidad baja de elución, la resolución será menor debido a que los aminoácidos a separar se difundan en el lecho cromatográfico, evitando su separación y con resultados malos.
Una vez eluídos los aminoácidos se llevo acabo la reacción colorida con Ninhidrina, a través de eso se pudo cuantificar por medio del espectrofotómetro a dos longitudes de onda diferentes, pero especificas para cada aminoácido (absorbancias de 400nm y 570nm). A partir de estos datos pudimos llevar a cabo el perfil de elución para estos aminoácidos, en el cual al observar en la gráfica No.1 el valor máximo de elución para la prolina es en 27mL a una absorbancia de 0.650 esto a una longitud de onda de 570nm, mientras que la Histidina presento su máximo valor de elución en