TEMA: OBTENCIÓN Y ANÁLISIS DE FRACCIONES CELULARES

INTEGRANTES:
ROSA CORDOVA VILLODAS
BASILIO PAPUICO ROMERO

PROFESOR: RAFAEL ALVIS

FECHA: JUEVES: 8:10 – 10:00 AM

2014 - I
1. Introducción

A. Marco Teórico

B. Objetivos
Obtención de fracciones celulares a partir de hígado de pollo.
Determinación del rendimiento y pureza de cada fracción.
Conocer la técnica de fraccionamiento celular para el estudio de las organelas celulares.
Usar colorantes que identifiquen organelas específicas celulares.
Comparar los tipos de microscopía de campo claro y …ver más…

Luego observamos la fracción nuclear. Para ello colocamos 10 μl del resuspendido del tubo marcado como núcleo, en una lámina porta objeto y le adicionamos una gota de Azul de metileno y lo cubrimos con una lámina cubreobjeto. Hicimos las observaciones en el microscopio de campo claro y realizamos sus esquemas. En otra lámina adicionamos 10 μl del colorante DAPI y cubrimos con una lámina cubreobjeto., dejamos reposar por 2 min. Y por último observamos en el microscopio de fluorescencia y realizamos los esquemas respectivos.

Por ultimo para observar las mitocondrias tomamos el tubo marcado con el nombre de mitocondrias y en un ependorf de 0,5 ml adicionamos 5 μl del resuspendido y 5 μl del colorante mytotracker dejándolo incubar por 10 min a 37°C. En otro ependorf de 0,5 μl realizamos la misma operación y adicionamos 5 μl del colorante verde de Janus. Realizamos un frotis y observamos en el microscopio de fluorescencia y de campo claro y finalmente esquematizamos a 400X.

3. Resultados

4. Análisis y discusión de los resultados

Núcleo (Azul de Metileno): En el experimento observado en el microscopio de campo claro, se le agregó a la muestra un colorante que coloreó a la muestra de un tono azul. Al ser acercada la muestra a los oculares del microscopio se observaron pequeñas organelas azules que