UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
Practicas laboratorio de biotecnología

Practica 1.

Electroforesis de proteínas en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE)

La electroforesis en gel de poliacrilamida con sodio dodecilo sulfato (SDS-PAGE) es un método económico, reproducible y rápido para cuantificar, comparar y caracterizar proteínas. Este método de separación de proteínas se basa en sus pesos moleculares (Laemmli, 1970).
Las proteínas pueden ser desnaturalizadas por detergentes iónicos fuertemente positivos o negativos. El detergente aniónico sodio dodecilo sulfato (SDS). El SDS en la concentración adecuada se une a la mayoría de las proteínas en una relación peso/peso constante (1.4 g de SDS/ g proteína). La …ver más…

Solución Stock de Acrilamida (100 ml) Acrilamida 29.2 g Bis-acrilamida 0.8 g
Adicionar agua destilada a 100 ml y agitar hasta disolver completamente. La solución de acrilamida debe ser cubierta con parafilm hasta que esté completamente disuelta.
La solución puede ser almacenada por meses en la nevera.

Precaución: La acrilamida es extremadamente tóxica, causa parálisis en el sistema nervioso central. Puede ser absorbida por la piel. Si la piel llega a estar en contacto con polvo de acrilamida o en solución, lavar con jabón y exceso de agua.

Solución B. Buffer del gel separador 4X (100 ml)
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 18.2g de Tris en 40 ml de agua, adicionar HCl para ajustar el pH a 8.8 y completar con agua destilada a 100 ml. La solución es estable por varios meses en la nevera.

Solución C. Buffer del gel concentrador 4X (100 ml)
0.5 M Tris-HCl (pH 6.8) 6.0 g de Tris en 40 ml de agua, adicionar HCl para ajustar el pH a 6.8 y completar con agua destilada a 100 ml. La solución es estable por varios meses en la nevera.

Persulfato de amonio, PSA (10 %), 5 ml
0.5 g PSA, adicionar 5 ml de agua. La solución es estable por varios meses en la nevera.

Buffer de