FRACCIONAMIENTO CELULAR EN HÍGADO DE RATÓN (Mus musculus) Y ESPINACA (Spinacia oleracea)

Resumen: El fraccionamiento celular consiste en la homogeneización de una muestra, la cual es sometida una ultra centrifugación, separando las fracciones subcelulares de acuerdo a sus propiedades. El objetivo de este estudio es comprender las técnicas de separación de células para el análisis posterior de los componentes celulares. Existen diversos métodos para la obtención de fracciones celulares como: centrifugaciones por gradiente discontinuo de densidad, centrifugaciones diferenciales; además de diversos tipos de rotores aplicados; estos pueden ser basculantes o de ángulo fijo. La separación adecuada de organelas se obtuvo de la …ver más…

Los rotores utilizados en los procesos de centrifugación pueden ser de ángulo fijo y basculante. Los basculantes se caracterizan por oscilar el ángulo de inclinación de los tubos, hasta un ángulo de 90º a medida que el rotor gira, A causa de su construcción, las centrífugas basculantes pueden alcanzar velocidades de hasta aproximadamente 3000rpm. Por el contrario en los rotores de ángulo fijo el ángulo de inclinación no varia, colocando los porta-tubos en una posición fija, generalmente en un ángulo de 52° respecto al eje vertical alrededor del cual rota. Estas presentan un diseño más aerodinámico y pueden obtenerse velocidades en el intervalo de las 7000rpm3.

La determinación de las fracciones celulares es posible mediante la aplicación de técnicas colorimétricas reaccionantes con los compuestos deseados. El 2,6-Diclorofenol indofenol (DCFIF) es un compuesto químico usado para presenciar la actividad fotosintética de los cloroplastos cualitativamente mediante una reacción colorimétrica. Posee una alta afinidad por los electrones, siendo entonces un excelente agente oxidante, actuando como un sustituto del NADP+ en la cadena transportadora de electrones. El avance de una reacción fotosintética puede ser medido por el cambio en la coloración de la muestra. Al añadir el DCFIF en su forma oxidada, la muestra se observa de color azul y, a medida que avanza el proceso