Practica # 1
DETERMINACION DE LA ENZIMA SACARASA

OBJETIVO:
Observar la acción catalítica de la enzima sacarasa sobre el sustrato específico que es la sacarosa.
FUNDAMENTO:
La sacarasa rompe enlaces (αβ 1-2) de la sacarosa dando como productos glucosa mas fructosa (azucares reductores que al hacer contacto con el reactivo de Benedict reducen en Cu ⁺⁺ a Cu⁺ y ellas se oxidan produciendo así acido aldónicos o urónicos.
INTRODUCCIÓN:
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible, pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor …ver más…

El primero en describir esta propiedad, poniendo asimismo su nombre de invertasa a la enzima fue Berthelot en 1860.

MATERIAL:
1 mortero
2 pipetas de 5ml
1 pizeta
1 filtro
1 embudo de filtración rápida
6 tubos de ensayo
1 termómetro
REACTIVOS:
Levadura
Arena
Éter
Agua destilada
Sacarosa al 1%
Almidón al 1%
Buffer de fosfato pH 5.8
Reactivo de benedict

PARTE EXPERIMENTAL:
Extracción de la sacarasa.- obténgase a partir de la levadura, moliendo un pedazo de levadura de pan, prsca y comprimida, en un mortero junto con 5 gr de arena y 10 ml de éter, mientras se hace la trituración se le va añadiendo agua en porciones de 2 ml hasta completar 30ml. Esta trituración y adición de éteres hace con el objeto de destruir las células de la levadura para que se queden en solución la enzimas que contienen, entre las que se encuentran la sacarasa.
Déjese reposar hasta que se haya sedimentado bien la arena y fíltrese.
Prepárese 6 tubos de ensayo como sigue:
A dos tubos de ensaye se la agregan 3 mls de extracto enzimático (sacarasa) más 3mls de agua y 1ml de buffer de fosfatos pH5.8.
A otros dos tubos se le introduce 3ml de extracto enzimático más 3 de sacarosa al 1% y 1ml de buffer de fosfatos.
Y en 2 tubos se le introducen 3ml de extracto enzimático más 3ml de almidón al 1% y 1 ml de buffer de fosfatos.

Mezclar los tubos perfectamente y se dejan reposar 30 min. A temperatura ambiente y al término de este periodo se hace la reacción