Bringing an Enzyme Back to Life
En los años 1950, los científicos descubrieron que el ADN tenía el código que las proteínas animales que se sintetiza. Sin embargo, la forma de una cadena de aminoácidos se pliega en una proteína completamente funcional, con la estructura tridimensional correcta, sigue siendo un misterio. Debe existir un mecanismo para asegurar el correcto plegamiento de la proteína. Pero ¿de dónde esa información? En 1957, Christian Anfinsen publicó la primera evidencia de que la información para el plegamiento correcto se llevó a cabo dentro de la propia proteína

Background
Las proteínas están formadas por combinaciones de 20 aminoácidos que se pliegan a continuación, en estructuras complejas. La cadena desplegada …ver más…

Las proteínas con puentes disulfuro requiere una medida adicional de tratamiento con un agente reductor para romper estos enlaces covalentes. Para desnaturalizar la ribonucleasa, Anfinsen primera reducido los puentes disulfuro con ácido tioglicólico. A continuación, la proteína desnaturalizada mediante el uso de una alta concentración de urea y de incubar la solución a temperatura ambiente. Se demostró que este tratamiento prestado la enzima inactiva, demostrando que la ribonucleasa ahora era incapaz de catalizar la escisión del ARN. Usando el ensayo espectrofotométrico, se llegó a demostrar que la ribonucleasa inactivo contenía ocho grupos sulfhidrilo, que correspondían a los cuatro puentes disulfuro rotos. Con una completamente reducida, proteína desnaturalizada en la mano, Anfinsen podría preguntar: ¿Puede una enzima desnaturalizada correctamente veces in vitro y se activan de nuevo?
Para encontrar la respuesta, Anfinsen permitido una solución de ribonucleasa reducida, desnaturalizado a oxidar. Se quitó la urea de la enzima desnaturalizada por precipitación. A continuación, se resuspendió la ribonucleasa desnaturalizado urea libre en una solución tamponada y se incubaron durante dos a tres días. La exposición al oxígeno molecular en la atmósfera oxida los residuos de cisteína. A continuación, se comparó la actividad de esta ribonucleasa renaturalizada a la de la enzima nativa. En los experimentos iniciales, 12-19 por ciento de la