Aislamiento, Purificación E Identificación De Adn
INTRODUCCION
El ADN o Acido Desoxirribonucleico es una macromolécula orgánica que forma parte de todas las células de todos los seres vivos. Es uno de los dos ácidos nucleicos que existen, contiene la información genética de los organismo y de algunos virus; siendo responsable de transmitir esta información a sus descendientes. Desde un punto de vista químico el ADN es un polinucleótido, esto quiere decir, Un polímero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre sí, como si fuera un largo tren formado por vagones. Cada vagón es un nucleótido, y cada nucleótido, a su vez, está formado por un azúcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina→A, …ver más…
3. Pasado este tiempo se calentó un poco a baño María a 30o C. este homogenizado se pasó a través de una gasa doble para filtrarlo. Se utilizaron guantes para poder exprimir la gasa sin tocarla directamente.
4. El líquido que se obtuvo del filtrado fue colocado en tubos de ensaye y centrifugado a 3000 r.p.m. por 5 minutos.
5. Se desechó el sobrenadante y el botón fue resuspendido con 5 ml de TRIS 0.4 M (para cada tubo de ensaye utilizado), el contenido de todos los tubos a los que se agregó TRIS fue recolectado en un vaso de precipitados.
6. A esta mezcla se agregaron 5 ml Lauril Sulfato de Sodio y se homogenizó. Posteriormente se añadieron 0.5 ml de EDTA Salino y finalmente 1 ml de Buffer CSC.
7. Se agregó esta mezcla poco a poco en un vaso de precipitados de 250 ml que contenia 50 ml de Etanol Frio (El etanol fue enfriado previamente en una cubeta con hielo).
8. Se observó como ascendió una nata de color blanco, esta nata era el ADN. Después de 10 minutos se recolecto la nata blanca con una cucharilla y se colocó en un vidrio de reloj, con un papel filtro se absorbió el exceso de alcohol y se dejó secar al sol un poco.
9. La nata de ADN fue colocada en un frasco con tapa y se le adicionó 40 ml de DSC. Esta mezcla se homogenizó agitando vigorosamente. Luego se le agregó 40 ml de mezcla de Sevag, agitando para homogenizar.
10. Esta mezcla fue repartida en tubos de ensaye y