UNIVERSIDAD ANDRES BELLO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGICAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR BIO 241

Informe de Laboratorio n°3
“Purificación de GFP y Blotting de Proteínas”

Nombres: Marion Olivares
Geraldine Urra
Paulina Encina
Sixto Yevenes Seccion: 2 Fecha de entrega: 25/05/2012 Profesores: Ana Mª. Meneses M. …ver más…

Procedimiento para “Dot blot”

1- Sobre una base de hojas de papel absorbente se coloco un trozo de membrana de nitrocelulosa seca de 10 cm x 10 cm.
2- En la membrana con un lápiz grafito se marcaron 3 puntos equidistantes.
3- Se sembró en los puntos marcados las siguientes soluciones:
Punto 1: 5 ul del tubo de recolección N°1 (obtenido en el práctico de purificación de GFP).
Punto 2: 5 ul del tubo de recolección N°2 (obtenido en el práctico de purificación de GFP).
Punto 3: 5 ul del tubo de recolección N°3 (obtenido en el práctico de purificación de GFP).

4- A temperatura ambiente sin agitación y sobre una hoja de papel absorbente nueva, se dejo secar la membrana ya sembrada.
5- En una bandeja de plástico, se sumergió la membrana en la solución de Rojo Ponceau 0,3% p/v en 5 % v/v de ácido acético, por 3 minutos a temperatura ambiente. Luego se recupero la solución.
6- Por ultimo , se lavo unas 4 veces con agua destilada en abundancia y con agitación suave. Si al cabo de los cuatros lavados aún no se notaban bien las marcas de los dots, debía repetirse la serie de lavados.
7- Finalmente se registraron los resultados y se evaluó cual elusión tenia mayor cantidad de proteínas.

Resultados
1) Purificación de GFP
Imagen 1: Cromatografía de interacción Hidrofóbica

En la Parte 1 se observa fluorescencia de GFP en la superficie de la columna por luz UV y en el tubo 1 solución transparente correspondiente al buffer.
En la