OPTIMIZACION DE LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

INTRODUCCIÓN.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica poderosa utilizada para la amplificación de un segmento especifico de una secuencia, ya sea de DNA o RNA, empezando con solo una pequeña cantidad de material, un segmento de DNA puede ser multiplicado más de 1 millón de veces.

Dada su gran sensibilidad, la PCR se ha convertido en una herramienta muy popular con un gran rango de aplicaciones como por ejemplo: se utiliza en la biología molecular para clonación y secuenciación de DNA; en el medio forense se utiliza para identificar a los sospechosos o las victimas por medio de muestras de sangre, semen, saliva o tejido encontrado en una escena del …ver más…

Esto se observa en los análisis de los productos de PCR como una falla en la síntesis del producto y como una banda fuerte de una longitud combinada de los primers.
• Tiempo y temperatura de desnaturalización. Las condiciones típicas de desnaturalización son de 94-95°C por 30 segundos a 1 minuto. De todas formas, temperaturas más altas son necesarias para templados ricos en G-C. La desnaturalización incompleta del templado y del producto PCR es una causa común de falla en la PCR.
• Temperatura de alineamiento. La temperatura de alineamiento y el tiempo de alineamiento del primer dependen de la longitud, concentración y composición de bases de los primers. Usualmente la temperatura de alineamiento debe ser entre 50-60°C. El aumento de la temperatura de alineamiento reduce la oportunidad del alineamiento inespecífico de los primers y por lo tanto la formación de un producto inespecífico.
• Tips para ordenar primers: Los primers típicos tienen de 18 – 25 nucleótidos de largo y estar constituidos en un 50% de G y C. Como regla general la Tm calculada para un par de primers deben están balanceadas (2° para A / T y 4° para G/C). Se debe evitar que los primers sean complementarios ya que esto estimula la formación de dímeros, reduciendo así su eficiencia en el alineamiento.
• Concentración del templado. Si la concentración del templado es muy baja