Protocolo fornecido pelo Laboratório de Farmacologia da Dor e NeuromodulaçãoUFRGS.
Referência: Oses JP, Cardoso CM, Germano RA, Kirst IB, Rucker B, Furstenau CR, Wink
MR, Bonan CD, Battastini AM, Sarkis JJ: Soluble NTPDase: An additional system of nucleotide hydrolysis in rat blood serum. Life Sci 2004, 74(26):3275-84.

ATIVIDADE DE ENZIMAS DO SISTEMA PURINÉRGICO

1) Identificar e conferir todo o material necessário.
2) Identificar os eppendorfs (1,5mL) de acordo com a tabela abaixo ou seja, 2 eppendorfs “controles” e 3 eppendorfs “amostra”, para cada amostra, para tanto você terá, controles sendo feitos em duplicata e amostra em triplicata. Os eppendorfs devem ser marcados nas tampas com canetas de cores diferentes, afim de serem facilmente identificados os nucleotídeos.
ATP: com canetinha vermelha
ADP: Azul
AMP: verde ou preta.

ATP

ATP

ADP

ADP

AMP

AMP

C1

C2

C1

C2

C1

C2

C1

C2

C1

C2

C1

C2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

A1

A2

C = Controle
A= Amostra

3) Separe um eppendorf para o BRANCO. Escreva um B na tampa do eppendorf.
4) Nos tubos identifcados adicionar 50 µL de Tris-HCl 450mM pH 7,5 +70 µL de água Milli-Q e 20 µL de soro. ATENÇÃO: Adicionar os 20 µL de soro somente dos eppendorfs “A” (amostra) e não nos “C” (controles).
5) Prepare o tubo B = TUBO BRANCO: somente 50 µL de Tris-HCl e 150 µL água (NÃO colocar nucleotídeo no