REDUCCIÓN DEL 2-6 DICLOROFENOL-INDOFENOL (DCPIP) DEPENDIENTE DE LA ACTIVIDAD FOTOSINTÉTICA DE CLOROPLASTOS AISLADOS DE Spinacea oleraceae (ESPINACA)

INTRODUCCIÓN

En los vegetales superiores los cloroplastos se presentan generalmente como cuerpos ovales de aproximadamente 5 a 10 μm de largo. Es en los cloroplastos donde se llevan a cabo las reacciones fotosintéticas de las células eucarióticas.
El proceso fotosintético en plantas superiores, lo podemos separar en dos fases: la primera, llamada fase luminosa ó fotoquímica, requiere de la energía luminosa y sus productos principales son: ATP, NADPH y O2. La segunda fase, también llamada la fase obscura de la fotosíntesis, requiere del ATP y de NADPH para transformar, por medios …ver más…

3 Mm de diámetro.
4. Filtrar la suspensión usando 8 capas de gasa, recoger el filtrado en dos tubos de centrífuga de 15 ml cada uno, previamente enfriados en hielo, repartir equitativamente el filtrado y balancear los tubos.
5. Centrifugar por 5 min. a 4000 rpm, decantar el sobrenadante y desecharlo.
6. El sedimento se resuspende con 2.0 ml de medio de aislamiento de cloroplastos. Durante toda la práctica se mantienen los cloroplastos en baño de hielo.
10. Tomar, con una pipeta Pasteur, una gota de la suspensión de cloroplastos y observarla al microscopio.
11. Tomar 0.5 ml de la suspensión de cloroplastos en un tubo de ensaye y ponerla durante 10 min. en agua hirviendo “Suspensión de cloroplastos hervidos”, y observarlos al microscopio.

B. Cuantificación de clorofila:

1. Para determinar la concentración de clorofila, colocar en dos tubos de centrifuga (los tubos deben ser de vidrio) 5 ml de acetona al 80% y 20 L de la suspensión de cloroplastos
2. Cubrir con parafilm, los tubos, agitarlos bien e incubar el tubo en la obscuridad por 5 minutos.
3. Centrifugar los tubos a 5000 r.p.m. durante 5 minutos, y colocar el sobrenadante en tubos de espectrofotómetro.
4. Leer su absorbancia a 645