Evaluación fitoquímica y antibacteriana de tintura 20 %

Resumen

En este trabajo se realizó la
evaluación fitoquímica y antibacteriana de tinturas
y extractos secos, obtenidos de las hojas y corteza del fuste de
la Mammea americana (Mamey amarillo). En el tamizaje
fitoquímico se emplearon técnicas simples y
rápidas, que requirieron un mínimo de equipamientos
y reactivos para las determinaciones de los diferentes
compuestos, identificándose los metabolitos secundarios
presentes en las tinturas al 20 % y en los extractos. Los
metabolitos predominantes obtenidos en las tinturas al 20 % son
alcaloides, coumarinas, taninos, quinonas y flavonoides,
comportándose de manera similar en los extractos secos.
Las tinturas al 20 % y extractos secos obtenidos a partir de los
órganos evaluados tienen actividad frente a
Staphylococcus aureus (ATCC) con tendencia a
dosis-dependencia, con halos de inhibición de 11,3 -12,7
mm, en hojas, y 12.7-15,0 mm, en la corteza del fuste para la
máxima concentración evaluada (720
&µg/disco).

Palabras claves: Mammea
americana, tamizaje fitoquímico, actividad
antibacteriana, extractos, diversidad.

Phytochemical and antibacterial evaluation of 20%
tintures and dry extracts, obtained from american Mammea
(yellow Mammee)

Abstract

In this work it was carried out the phytochemical and
antibacterial evaluation of tintures and dry extracts, obtained
from american Mammea (yellow Mammee) leaves and stem
bark. In the phytochemical screening they were used simple and
quick techniques requiring a minimum of equipments and reagents
for the compound determinations, being identified the secondary
metabolites present in the 20% tintures and in the extracts. The
predominant metabolites obtained in the 20%tintures are
alkaloids, coumarines, tannines, quinones and flavonoids. This
occurs in a similar way in the dry extracts. The 20% tintures and
dry extracts obtained from the evaluated organs show activity
against Staphylococcus aureus (ATCC) with tendency to
dose-dependence, with halos of inhibition of 11,3 -12,7 mm, in
leaves, and 12,7–15,0 mm, in the stem bark for the evaluated
(720 &µg / disk) maximum concentration.

Key words: Mammea americana, phytochemical
screening, antibacterial activity, extracts,
diversity.

1.
INTRODUCCIÓN

La situación económica
actual, el deterioro del poder adquisitivo de las clases
más desposeídas, la crisis de los servicios de
atención a la salud y una medicina cada día
más costosa, han hecho que se incremente el uso de las
plantas como una alternativa válida para enfrentar el
proceso salud-enfermedad, práctica que se ve reforzada por
el hecho de ser medicamentos de eficacia comprobada. En
relación con el uso de las plantas existe un gran
desconocimiento sobre como emplearlas, sus principios
tóxicos y su dosificación para lograr efectos
terapéuticos.

Su uso además, deja al descubierto
un proceso mágico, folklórico y científico,
que solamente alguien conocedor de esta tríada, puede
relacionar para poder llegar a un buen diagnóstico en caso
de ingestión accidental, o de suministro inadecuado de
brebajes elaborados con plantas para alguna afección en el
niño y/o en el adulto1.

Las plantas medicinales tienen propiedades
curativas que ya eran conocidos en la antigüedad, aunque
también se han añadido al arsenal
terapéutico otras plantas cuya utilidad ha sido
descubierta recientemente. Hasta el desarrollo de la
química, y, particularmente, de la síntesis de
compuestos orgánicos a lo largo de los siglos XIX y XX,
las plantas medicinal eran prácticamente la única
fuente de principios activos capaces de mejorar el estado de
salud de las personas. Las plantas medicinales continúan
teniendo una gran importancia para personas que no tienen acceso
a las medicinas modernas y, además, muchos medicamentos
modernos dependen en gran medida en los mismos principios
activos. Éstos difieren de unas plantas a otras debido a
su biodiversidad, ya que el código genético de cada
especie vegetal contiene información para producir
compuestos químicos diferentes2.

Mammea americana (Mamey amarillo),
es una de las plantas que popularmente se le atribuyen
propiedades medicinales en la curación de diversas
enfermedades, como: antiparasitaria3 e insecticida4, utilizando
para este, el látex de la semilla contra el
Aedes Aegypti, eliminando las larvas de ese vector. Se come
la fruta para tratar la anemia, la resina y la decocción
de la corteza se utilizan contra los parásitos,
infecciones micóticas y eczemas. La infusión de sus
hojas es un antifebrifugo5.

Es importante que estas se validen
científicamente y propiciar un incentivo adicional para su
multiplicación y propagación; de esta manera, la
planta podría ser aprovechada no solo de forma popular a
partir del conocimiento tradicional comprobado, sino
también en los servicios de salud especializados.6,
7

2. MATERIALES Y
MÉTODOS

2.1. Selección y tratamiento del material
vegetal

Se seleccionó la planta Mammea
americana (Mamey amarillo), atendiendo a los reportes
populares sobre su empleo en la curación de diversas
afecciones de la piel, sus efectos terapéuticos no han
sido validados experimentalmente, considerando la disponibilidad
de la misma y que su acción antibacteriana no ha sido
reportada hasta el momento.

El material vegetal fue recolectado el 17
de abril de 2010, en la localidad Los Rondones, municipio
Jiguaní, provincia de Granma, a las 8:00 A.M. a una
temperatura de 23,5 ºC la identificación fue
realizada por el Departamento de Botánica de la Facultad
de Ciencias Agrícolas de la Universidad de
Granma.

El material fue lavado, con el
propósito de eliminar la parte del material el cual no
reunía las condiciones para su posterior estudio,
según NRSP 309 del MINSAP (8).

Se tomaron muestras en estado adulto(hojas
y corteza del fuste) las cuales fueron lavadas y desinfectadas
con una disolución de hipoclorito de sodio al 2%
(9), secado a la sombra a temperatura ambiente y extendido
en bandejas perforadas, volteándose diariamente durante 7
días, luego se sometió a temperatura de 60 0C
durante una hora en un horno estufa con circulación de
aire (WSU 400, Alemana), triturándose hasta obtener un
polvo grueso de 1 a 2 mm de diámetro, utilizando un tamiz
circular (TGL 0-4188 WEB Metallwebwrei Neustadt-Orla, Alemania) y
la corteza del fuste fue cortada previamente en fragmentos
pequeños de 1 a 1,5 mm de diámetro, lo que fueron
previamente cortados en fragmentos de 0,5 a 1cm de largo y
finalmente molinar hasta obtener una partícula de 3,5 mm,
que se empleó en la elaboración de los extractos y
tinturas.

2.2. Formulaciones

2.2.1. Tintura al 20%:

Las tinturas 20% fueron obtenidas a partir de los polvos, en
hojas (tamaño de partícula menor de 2 mm de
diámetro), y en la corteza del fuste, utilizando como
menstruo una solución etanólica al 70 % (v/v) en
agua destilada. Se utilizaron 50 g de la droga cruda para obtener
250 mL de tintura al 20%. El método de extracción
empleado para la obtención de las tinturas fue la
maceración de la droga pulverizada en zaranda (MLW,
Alemania) a 60 rpm durante 15 min a intervalos de 10 h, por un
tiempo de siete días, según la Norma Ramal de Salud
Pública 312 (1998), 11 la Norma Cubana de Salud
Pública 313 (1998) ,12 y el Programa de Medicina
Tradicional y Natural (1999). 13

2.2.2. Extracto seco a partir de la
tintura:

Los extractos secos de las partes estudiadas de la
planta Mammea americana (Mamey amarillo) fueron obtenidos a
partir de las tinturas al 20% por rotoevaporación del
solvente a 50oc en un Rotovaporador (KIKA LABORTECHNIK HB4
Basic), hasta obtener una masa consistente, la cual fue secada en
una estufa, con recirculación de aire a 40ºC, hasta
obtener una masa consistente y preservados en frasco color
ámbar.

Luego a cada una de estas fracciones se le
realizó tamizaje fitoquímico y pruebas
microbiológicas.

2.2.3. Evaluación de la actividad
antibacteriana

Para la evaluación de la actividad antibacteriana
de los extractos secos de la corteza del fuste y de las hojas de
la Mammea americana (Mamey amarillo) se empleó el
método de difusión en agar por diseminación
superficial en discos (Bauer-Kirby) adoptado por el
Clinical and Laboratory Standards Institute
(CLSI) como norma de aceptación general14, en el
ensayo de actividad antibacteriana se utilizaron cepas de
referencia internacional, depositadas en el American Type
Culture Collection (ATCC), estas fueron: Pseudomonas
aeruginosa (ATCC 27853), Staphylococcus aureus
(ATCC 29737), E.Coli (113-3) y cepas comerciales como
Bacillus Suptilis a concentraciones de 180, 360 y 720
&µg /disco, respectivamente.

2.2.4. Análisis
estadístico

Se empleó un ANOVA de clasificación simple
en la comparación de varias muestras por el test de
Fisher, en los casos en que hubo diferencias
estadísticamente significativas para un valor de p<0.05
se realizó un test de rangos múltiples para
determinar las medias que diferían. El método
utilizado para discernir entre las medias fue el procesamiento de
las menores diferencias significativas de Fisher
(LSD).

3. RESULTADOS Y
DISCUSIÓN

3.1. Tamizaje fitoquímico de tinturas a 20% y
extractos secos de las hojas y corteza del fuste de la Mammea
americana

En el resultado del tamizaje fitoquímico
realizado a las tinturas al 20% y extractos secos, de las
diferentes partes de las plantas en estudio (tabla 4), se
puede observar una alta variedad de metabolitos secundarios,
destacándose un alto contenido de alcaloides, coumarinas y
quinonas, los demás metabolitos se encuentran en menor
proporción.

Tabla 1. Resultados del tamizaje fitoquímico
de la tintura 20% y extracto seco

A partir de las tinturas al 20 % se
obtuvieron los extractos secos, por evaporación total del
solvente (etanol 70 % (v/v)) a 50 ºC mediante
roto-evaporación al vacío.

Tanto en la tintura 20% como en el extracto
seco de hojas y corteza de Mammea americana, se
encontraron alcaloides y coumarinas, excepto en el extracto seco
de las hojas. También hubo presencia de taninos, quinonas
y flavonoides. En el caso de las tinturas al 20 % en las parte de
las hojas fue más abundante las coumarinas y en la corteza
del fuste fue donde mejor hubo presencia de metabolitos, pues hay
abundancia de alcaloides, coumarinas y quinonas. En el extracto
seco de la corteza del fuste hubo presencia alcaloide,
coumarinas, taninos, quinonas, flavonoides y alcaloides. Se
destacan en ambas partes de la planta la presencia de alcaloides
y quinonas, metabolitos reportados como responsables de
diferentes actividades biológicas en las plantas como la
antibacteriana. Al realizar una comparación en cuanto a la
cantidad de familias químicas presentes en los extractos
secos de las partes de la planta evaluadas se llega a la
conclusión que existe un balance entre todas ellas. Los
mejores resultados en cuanto a cantidad de familias de
metabolitos secundarios correspondieron a la tintura 20 %de la
corteza del fuste.

A partir de los resultados obtenidos hasta
el momento se llega a la conclusión que los compuestos
químicos pertenecientes a la familia de los alcaloides,
coumarinas, taninos, quinonas y flavonoides se encuentran en los
extractos evaluados. Por tanto es posible emplear los extractos
secos de las partes evaluadas de la Mammea americana en
la evaluación de la actividad antibacteriana de los
mismos.

Se evidencia que la gentamicina presenta
halos de inhibición entre 20-24 mm de diámetro
frente a las cepas Staphylococcus aureus (ATCC 29737)
por lo que es sensible y no mostró halos de
inhibición frente a Pseudomonas aeruginosa (ATCC
27853) por lo que es resistente (R). 15 Los controles negativos
(etanol al 70 % y DMSO) no inhibieron el crecimiento de ninguna
de las cepas bacteriana evaluadas por lo que los resultados
obtenidos no estarán influidos, en principio, por el
solvente. Al realizar el análisis de los resultados de la
actividad antibacteriana de las tinturas al 20 % se evidencia que
frente a Staphylococcus aureus (ATCC 29737) tuvieron
resultados positivos en las hojas y corteza del fuste.

Todos los extractos secos mostraron
actividad antibacteriana frente a las cepas de
Staphylococcus a las concentraciones 180
&µg/disco de 360 &µg/disco y 720
&µg/disco con halos de inhibición entre 11 -13
mm de diámetro.

A pesar de esto no se encontraron
diferencias estadísticamente significativas entre ellos a
la máxima concentración evaluada (720
&µg/disco), sin embargo hubo diferencias
estadísticamente significativas entre los halos de
inhibición de todos los extractos vegetales evaluados y la
gentamicina. Estos resultados no son desalentadores por cuanto se
debe tener en cuenta la diferencia de concentraciones entre los
discos de gentamicina y los que contienen las tinturas al 20 % y
los extractos secos de Mammea americana. En este
sentido, los discos comerciales contienen el principio activo con
altos niveles de pureza, en tanto para los discos de papel de
filtro que contienen los extractos vegetales las concentraciones
reportadas se refieren a la masa de sustancias solubles en etanol
al 70 % (m/v). Se planteó anteriormente que estas muestras
contienen varias familias de metabolitos secundarios, tales como
alcaloides, coumarinas, taninos, quinonas y flavonoides. Por
tanto, es probable que si se logra el aislamiento y
purificación del (o los) principio (s) activo (s), se
requiera de concentraciones menores para lograr resultados
semejantes a los obtenidos con la gentamicina. Estos resultados
sugieren que la planta de Mammea americana presenta
metabolitos secundarios, solubles en etanol al 70 % (m/v), con
actividad antibacteriana que están distribuidos en todos
los óranos de la planta.

Con el objetivo de determinar si existe una
relación entre la concentración del extracto seco y
la actividad antibacteriana de estos, se probaron tres
concentraciones (180, 360 y 720 &µg/disco) para cada
uno de ellos. A pesar de esto se pudo evidenciar que se tiende a
la dosis-dependencia entre las concentraciones evaluadas y los
diámetros de los halos de inhibición para cada
muestra. Estos resultados concuerdan con la mayoría de los
principios activos que se conocen, para los cuales se cumple que
a mayores concentraciones de principio activo es mayor la
actividad biológica de estos. 16

Ninguna de las tinturas al 20 % ni
extractos secos de los clones de Cacao evaluados mostró
actividad antibacteriana frente a Pseudomonas aeruginosa
(ATCC 27853). En otros estudios realizados por AlimIsmihan et
al,17en el aceite esencial de Cyclotrichium niveum
(Boiss.) contra bacterias Gram (+) y Gram (-) frente a nueve
microorganismos, cuatro de ellos presentes en este trabajo,
demuestran que el más resistente es el P.
aureginosa, aunque es de destacar que en los aceites
esenciales de la planta se encuentran mayormente los metabolitos
concentrados, por esta razón los halos de
inhibición del resto de los microorganismos fue mayor con
respecto al de este trabajo.

Adicionalmente, en estudios realizados por
Mothana et al. (2009)18 con 26 plantas encontraron que
solo 4 de ellas mostraron actividad antibacteriana frente a
P. aeruginosa. Se han descrito varios mecanismos de
resistencia de P. aeruginosa que podrían explicar
la ausencia de actividad de los extractos vegetales evaluados
frente a esta cepa. Estos incluyen baja permeabilidad de la pared
celular a los agentes antibacterianos, capacidad genética
de expresar un amplio repertorio de mecanismos de resistencia,
por mutaciones en los genes cromosomales que regulan la
expresión de genes de resistencia y por la
adquisición de genes de resistencia foráneos
vía plásmidos, transposones y bacteriófagos.
19

Se empleó la cepa Bacillus
subtilis (ATCC 6633) como bacteria gram-positiva que
pertenece al género Bacillus y que aunque en
raras ocasiones se puede encontrar como causante de meningitis,
endocarditis y conjuntivitis en pacientes inmunocomprometidos, es
el modelo biológico de preferencia en diferentes
investigaciones. Esta bacteria constituye el homólogo de
Escherichia coli en las bacterias gram-positivas.
Ninguno de los extractos vegetales evaluados mostró
actividad antibacteriana frente a esta cepa de Bacillus
subtilis, tampoco para la cepa de E. coli.

Las plantas presentan metabolitos
secundarios, tales como alcaloides, coumarinas, taninos, quinonas
y flavonoides. Estas familias de metabolitos secundarios son las
más probables responsables de la actividad antibacteriana
dado que todos los extractos fueron positivos al ensayo
realizado.

El mayor halo de inhibición del
crecimiento bacteriano los mostró el extracto seco del de
la coerteza con 15 mm, para la concentración de 720
&µg/disco frente a las cepas de Staphylococcus
aureus (ATCC 29737).

Conclusiones

• Los metabolitos predominantes en tinturas 20% y
  extractos secos son alcaloides, coumarinas, taninos, quinonas
  y flavonoides.

• Las tinturas al 20% y extractos secos tienen
  actividad antibacteriana frente a Staphylococcus
  aureus (ATCC 29737) con halos de inhibición entre
  11 -13 para las hojas y 13,7 -15,0 para la corteza del fuste,
  con tendencia a dosis-dependencia, sin diferencias
  estadísticamente significativas entre ellos en las
  hojas, en la corteza del fuste existe diferencias
  significativas para la máxima concentración
  evaluada (720 &µg/disco).

• Existen diferencias estadísticamente
  significativas de las tinturas 20% y los extractos evaluados
  con respecto al control positivo.

Referencias
Bibliográficas

• 1. Martínez N. (2010). Las
  plantas medicinales (primera parte). Disponible en la Word
  Wide Web:
  http://www.slan.org.ve/publicaciones/completas/plantas_medicinales_1.asp.
  Consultado: 04/01/2011

• 2. Todo plantas (2006). Disponible en
  Word Wide Web: http://www.todoplantas.net/ Consultado:
  04/01/2011.

• 3. Prieto A., Auró De Ocampo A.,
  Fernández A., y Pérez M., (2005). El Empleo
  de la Medicina Natural y Tradicional en el Control de
  Enfermedades de Organismos Acuáticos y Potencialidades
  de Uso en Cuba y México. Tip Revista especializada en
  Ciencias Químico – Biológias, junio,
  año/vol.8, número 0001, Universidad
  Autónoma de México – México,
  pp. 38-59,

• 4. Parra G, – Henao, García
  Carlos M., Cotes Torres Pajo José M., (2007).
  Actividad insecticida de extractos vegetales sobre Rhodnius
  prolixus y Rhodnius pallescens (Hemiptera: Reduviidae).
  Instituto Colombiano de Medicina Tropical-CES,
  Medellín. Univesidad Central de Colombia, Sede
  Medellín Boleto de Malariologo y Salud Ambiental.
  ISSN1690-4648.

• 5. Godínez D, – Caraballo y
  Volpato G., 2008). Plantas Medicinales que se venden en
  el Mercado El Río, Camagüey, Cuba. Revista
  Mexicana de Biodiversidad 79: 243-259.

• 6. Pedraza, K. L., (2000). Plantas con
  flores de los alrededores de la Laguna de Chisacá,
  Sumapaz", Colombia, Trabajo de grado (Biólogo),
  Universidad Nacional de Colombia-Facultad de
  Ciencias-Departamento de Biología, Bogota,
  236.      

• 7. Plantas Medicinales (2004). Recetas y
  Usos. Disponible en la Word Wide Web: http://
  www.infopeople.com. Consultado: 22/09/2011

• 8. Ministerio de Salud Pública. NRSP
  No. 309 (1992). Medicamentos de origen vegetal: droga
  cruda. Métodos de ensayos. La Habana. Cuba.
  MINSAP.

• 9. Carballo C. et al (2005).
  Desinfección química de Pedilanthus
  tithymaloides L. Poit. Rev Cubana Plant
  Med. 10 (2).

• 10. Norma Ramal de Salud Pública 312
  (1998). Métodos de ensayos para la
  determinación de los requisitos de los extractos
  fluidos y tinturas. Salud Pública. La Habana,
  Cuba.

• 11. Norma Cubana de Salud Pública
  313(1998). Métodos de ensayos a partir de drogas
  crudas. Salud Pública.

• 12. Programa Nacional de Medicina
  Tradicional y Natural (1999). Ministerio de Salud
  Pública. La Habana, Cuba.

• 13. Programa Nacional de Medicina
  Tradicional y Natural (1999). Ministerio de Salud
  Pública. La Habana, Cuba.

• 14. CLSI (Clinical and Laboratory Standards
  Institute) (2007). Disk Diffusion Supplemental Tables.
  M100-S17 (M2). CLSI, Wayne Pa.

• 15. Ávila l, Baquero E, Viña A
  y Murillo E (2006). Vitae 13
  (1).

• 16. Fuertes CM, Roque RA y Tristan M
  (1998). Flavonoides y alcaloides de Lupinus
  ballianus c.p. smith con actividad antibacteriana y
  antifúngica. Ciencia e Investigación 1
  (2).

• 17. Ahmet AlimIsmihan Goze, Ali Cetin, Ahmet
  Duran Atas, Senay Akkus (2009). Cetinus and Nilufer Vural
  Chemical composition and in vitro antimicrobial and
  antioxidant activities of the essential oil of
  Nepeta nudaL. subsp. Albiflora (Boiss.)
  gams African Journal of Microbiology Research Vol. 3(8) pp.
  463-467, August, 2009Available online
  http://www.academicjournals.org/ajmrISSN 1996-0808 ©2009
  Academic Journals.

• 18. Mothana RA, Lindequist U, Gruenert R and
  Bednarski (2009). Studies of the in vitro
  anticancer, antimicrobial and antioxidant potentials of
  selected Yemeni medicinal plants from the island Soqotra.
  BMC Complementary and Alternative Medicine 9:
  7.

• 19. Lambert PA (2002). Mechanisms of
  antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa.
  Journal of Royal Society of Medicine 95 (41):
  22-26.

Autor:

Lic. Harold Remón Rodríguez
1

Lic. Yuniel Capote Martínez 2

DrC Manuel Almeida Saavedra 3

Dra. C. Galina Morales Torres 3

DrC. Quirino Arias Cedeño 3

DrC Melquíades Ramos Escalona 1

1 Departamento de Ciencias Básicas.
Facultad de Ciencias Técnicas. Universidad de Granma,
Carretera a Manzanillo Km. 17 ½, Bayamo, Granma,
Cuba.

2 Laboratorio de Líquidos orales.
Carretera de Santiago de Cuba, Bayamo, Granma.

3 Centro de estudio de Química
Aplicada. Facultad de Ciencias Técnicas. Universidad de
Granma. Universidad de Granma, Carretera a Manzanillo Km. 17
½, Bayamo, Granma, Cuba.