b) Observe el termorregulador por
cualquiera alteración en su posición
preestablecida.
c) Coloque las muestras, platos y tubos,
en una posición segura.
d) Un papel de filtro humedecido con
agua en el
fondo de la incubadora, es adecuado para mantener la humedad
requerida.
e) Las incubadoras de CO2 requieren
medir el nivel de gas
diariamente.
f) El jefe de sección debe ser
notificado cuando una incubadora falla en mantener el rango
de temperatura aceptable.g) Observe macroscopicamente los platos
Petri para observar desecación.h) En incubadoras de CO2 , se puede
colocar un cultivo de N. gonorrhoeae ATCC 43069 ,
subcultivandola cada día, para observar su
óptimo crecimiento, ya que es un microorganismo que necesariamente requiere CO2
para crecer.i) Todas las incubadoras deben ser
limpiadas mensualmente y llevar un récord de mantenimiento
preventivo.
b) Autoclaves :
Procedimiento Por corrida Diario Semanal Mensual
1. Examine récord de Temperatura y
Presión
X
2. Utilice Indicadores de
Esterilización X
3. Récord de uso, fecha, temperaturas,
presión X
4. Chequeo del nivel de agua X
5. Uso de Indicadores biológicos de
Esterilidad X
6. Chequeo de la válvula de seguridad
X
7. Limpieza del Interior y Exterior. X
8. Limpieza de la Pantalla de Temperatura
X
9. Limpieza del drenaje y sellos X
Control de calidad del autoclave :
Para controlar la eficiencia del autoclave,
recomendamos utilizar la cepa control Geobacillus (antes
Bacillus ) stearothermophilus ATCC 7953.
También puede utilizarse otros controles
comerciales, tales como las tiras reactivas, tapes para
autoclave, cápsulas spot, etc.
De no contarse con ninguna de las anteriores, un
método
cualitativo consiste en colocar una cepa de Bacillus subtilis en
un Tioglicolato. Incubar por 24 horas a 35ºC y
posteriormente colocar el tubo durante la rutina de trabajo del
autoclave. Luego de la esterilización, se transfiere con
un hisopo a un agar sangre el cual se
incuba a 35ºC por 24 horas. No debe haber crecimiento en el
agar sangre, si la autoclave a trabajado adecuadamente.
c) Cámaras de bioseguridad :
a) Apague la lámpara Ultravioleta
antes de comenzar a trabajar.b) Prenda el blower 15 minutos antes de
utilizar.c) Observe que no se obstruye el flujo
de aire.d) Si hay derrame dentro de la cabina,
limpie con un desinfectante apropiado, manteniendo apagada la
cabina.e) Evite el uso de mecheros de flama
dentro de la cabina.f) Lleve un control de la medida del
flujo de aire.g) Lleve un control de la
calibración del flujo de aire.h) Lleve un control del reemplazo de los
filtros.i) Compruebe los sistemas de alarma de
funcionamiento.j) La superficie interior de la mesa de
trabajo de la cabina, puede ser cultivada semanalmente para
detectar contaminación.k) Desinfecte la cabina antes y
después de utilizar.l) No utilice las cabinas
biológicas para hacer mezclas de
sustancias químicas y viceversa.m) Cuando trabaje en la cabina, evite la
entrada brusca de aire y el uso innecesario de las puertas
del área.
c1) Control de calidad de las cabinas de
seguridad biológicas :
Es altamente recomendado controlar la calidad de
la integridad operativa de las cabinas de seguridad ( CSB ). Para
ello es recomendable que las mismas sean certificadas al menos
una vez al año, por un certificador autorizado. Los
test que a
continuación se detallan, son aplicables a los 3 tipos de
CSB :
Test de velocidad
del aire. Incluir la rata de aire expelida.Rata de flujo de aire en el perímetro
de trabajo. Es bueno anotar que el test de humo es un
indicador de flujo de la dirección del aire, no de su
velocidad.Test de integridad del filtro HEPA.
Prueba de presión. Es para determinar
fuga en la estructura
de la cabina. Se debe realizar durante la instalación
inicial, después de ser movida de posición y/o
después de reparación o cambio de
filtros.El test de seguridad, se realiza para
verificar potenciales peligros en el sistema
eléctrico, polaridad, interruptores y resistencia de
circuitos
a tierra.Test de la intensidad de la luz durante
la operación de la cabina.Test de vibración de la cabina.
Test de ruido de
la cabina. Estos últimos test, sirven para evitar
fatiga en el operario.Test de la lámpara ultravioleta ( UV )
. El método es como sigue :Encender la lámpara ultravioleta por 5
minutos.Colocar el sensor de medición de UV en el centro de la mesa
de trabajo.La radiación medida no debe ser menor de
40 microwatts por cm² a 254 nanometros (nm).
d) Incinerador :
a) En condiciones normales el
incinerador logra la temperatura óptima de
esterilización ( 81.5 °C ) 10 minutos
después de haber sido encendido.b) Bastan 5 segundos para lograr la
destrucción de bacterias, hongos y
micobacterias.c) No es necesario observar
incandescencia en el asa para lograr la
esterilización.d) Inspeccione la cerámica del incinerador por
rajaduras.e) Aleje el incinerador de elementos que
puedan incendiarse por el calor generado.
e) Generadores de ambiente (
Sistema GasPak®) :
a) Mantenga los generadores de gas a
temperatura ambiente y el sobre sellado.b) Mantenga los catalizadores en lugar
seco, a temperatura ambiente y las bolsas sellados.c) Mantenga los indicadores de
anaerobiosis a temperatura de refrigeración
( 2-8°C ).
d) El tiempo de
generación de la atmósfera dentro de la jarra es de 30
minutos.e) El indicador de anaerobiosis cambia
de color azul
a blanco dentro de la jarra en 4 a 5 horas.f) Una evidencia sugestiva de ambiente
anaerobio, es el cambio de color a rojo vino del agar
sangre.g) Algunos microbiólogos utilizan
un agar inoculado con Clostridium novyi B
( ATCC 19402 ) como indicador de ambiente
anaerobio, ya que el mismo es anaerobio estricto.
h) Los catalizadores de Paladio, pueden
ser regenerados colocándolos en horno a 160 °C por
2 horas. Guardar los pellets en envase cerrado.i) Control biológico de
crecimiento:
CEPA ATCC RESULTADO
Cl. perfringes 13124 Crece
Micrococcus luteus 9341 No crece
Campylobacter jejuni 33291 Crece
f) Refrigeradoras :
a) Control diario de la temperatura en
hoja de formato mensual.b) Coloque los platos Petri en
posición invertida con la tapa hacia abajo.c) Mantenga la temperatura entre 4
– 8 ° C.d) Utilice refrigeradoras que no hacen
escarcha.e) No coloque medios de
cultivo aún ligeramente calientes dentro de la
refrigeradora.f) Evite abrir con frecuencia la puerta
de la refrigeradora.g) Lleve un registro de
problemas de funcionamiento, causa y solución.h) No guarde alimentos en
refrigeradoras para especimenes clínico.
g) Microscopios :
Cuidados y mantenimiento Diario Mensual Semestral
1. Limpieza del aceite de
objetivos,
condensador, etc X
2. Apagar la fuente de luz X
3. Colocar cobertor contra el polvo X
4. Limpieza de Ocular, condensador, diafragma
con líquido de limpieza de lentes X
5. Limpieza y ajuste del sistema óptico
X
6. Limpieza y ajuste del sistema lumínico
X
7. Limpieza y lubricación del sistema
mecánico X
_____________________________________________
h) Centrífugas :
_____________________________________________
Elemento / acción
Por corrida Diario Semanal Mensual Anual
1. Verificar tubos por rajaduras X
2. Verificar por restos de vidrio o
líquido
dentro del portatubo o las copas X
3. Verificar por balance de cada lote X
4. Verificar por la temperatura de
funcionamiento ( Refrigeradas ) X
5. Limpieza de cualquier derrame X
6. Limpieza de la olla del rotor X
7. Limpieza externa X
8. Desinfección de la olla del rotor X
9. Verificación de brochas X
10. Chequeo del circuito eléctrico X
11. Certificación del velocímetro
X
12. Medición de la temperatura interna
X
con termómetro calibrado ( Centrífugas
refrigeradas )
Problemas y Limitaciones:
Vibración
Chequear por balance apropiado.
Chequear tamaño de los tubos.
Mirar si la centrífuga está
sobre una superficie plana.
Rotura
Chequear tamaño de los tubos.
Balance correcto.
Verificar el interior de los portatubos
Desprendimiento de tapas:
a) Utilice tapas de rosca.
b) Si no es posible, use Parafilm sobre
los tapones de caucho.c) Siempre que sea posible utilice tubos
de plástico.
4) No centrifuge grandes volúmenes de
líquidos inflamables, los cuales pueden
producir vapores que pueden incendiarse durante
la operación del equipo.
d) La concentración de materiales
infecciosos para cultivo puede realizarse en el área
rutinaria de cultivo, siempre y cuando los tubos estén
bien cerrados.
e) No colocar las tazas o los portatubos
en el horno o autoclave para descontaminar.
f) Evitar utilizar para la limpieza
soluciones
que contengan cloro o sal, ya que son altamente
corrosivas.
8. CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS
AUTOMATIZADOS
El laboratorio de microbiología moderno se auxilia de equipos
computarizados para ayudar en la rapidez y precisión del
diagnóstico etiológico. En la
sección de Microbiología del Laboratorio
Clínico del C.H.M,Dr. A.A. Madrid
contamos hasta la fecha de 4 sistemas computarizados:
BacT/Alert y Bactec para los hemocultivos, Vitek
System para la identificación y antibiogramas y el
Bactec MGIT 960 para la detección de
micobacterias.
Cada uno de éstos equipos, consta de sus
propios sistemas para el control de calidad. A
continuación presentamos algunas observaciones relativas
al control de calidad de los referidos equipos:
a) BacT/Alert ® :
El sistema BacT/Alert es utilizado para la
detección temprana de microorganismos en hemocultivos u
otros fluidos corporales. El sistema utiliza un sensor
colorimétrico y una luz reflejada para monitorear la
presencia y producción de CO2 disuelto en el medio de
cultivo. Si existen microorganismos en la muestra, se
genera CO2 cuando los microorganismos metabolizan los substratos
del medio de cultivo. Si el crecimiento de los microorganismos
genera CO2, el color del sensor gas-permeable instalado en el
fondo de cada frasco de cultivo cambia de verde a amarillo.
Cada equipo trae consigo un kit de reflectancia
estándar para los procedimientos de control de calidad y
de calibración. Además, de un software para ayudar en
pantalla a realizar el mismo. A parte de esto, cada lote de
frascos de cultivo es suministrado con un Certificado de Análisis de control de calidad de
fábrica.
El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control
de calidad: Control de calidad de las celdas, Calibración
de las celdas y Calibración de la temperatura del
equipo.
La opción Control de Calidad de las
Celdas es utilizada para asegurar que las celdas del
instrumento están en su óptima capacidad de
detección.. Este control debe ser parte del mantenimiento
normal del sistema. Un kit estándar de reflectancia es
proporcionado con cada instrumento para los procesos de
control de calidad y calibración. Son dos
estándares de reflectancia en cada kit, sin embargo, el
proceso de
control de calidad solo utiliza el estándar de
reflectancia B. El anillo al final de los estándares
identifica su número estándar de reflectancia.
Cuando el control de calidad de una celda falla y no es
recalibrada, ésta automáticamente es
inactivada.
Generalmente el periodo de control de calidad
para cada celda está configurado en 30 días en base
al menú Editar Configuración del Sistema del
capítulo Mantenimiento de Funciones del
Sistema. Este control solo se puede realizar en celdas
vacías. Al final de que todas las celdas han sido
evaluadas, puede obtenerse por impresión un reporte del
estado de las
Celdas, luego de lo cual el instrumento retorna
automáticamente al menú Funciones de Mantenimiento
del Instrumento.
La opción Calibración de
Celdas, es utilizada para recalibrar cualquier celda que haya
fallado el control de calidad. El kit viene con dos
estándares de reflectancia. El procedimiento
utiliza ambos. El instrumento automáticamente recalibra la
celda una vez se ha introducido el estándar cuando lo
indique el instrumento. Si la calibración de la celda
falla, el instrumento automáticamente inactiva la celda.
Al final se puede obtener un reporte del estado del instrumento y
la pantalla retorna automáticamente al menú de
Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opción Calibración de la
Temperatura, es utilizada para calibrar la temperatura dentro
del instrumento. Primero se mide la temperatura interna del
instrumento utilizando el proceso descrito en Verificación
de la Temperatura del capítulo Mantenimiento Preventivo.
Solo utilice ésta opción si hay discrepancia entre
la temperatura marcada por el equipo y la temperatura
óptima preestablecida.
En el Menú principal ir a Otras
Funciones BacT/Alert.Mantenimiento del Instrumento.
a1) Control de calidad.
b1) Control de calidad de celdas.
c1) Lista de Celdas
d1) Seleccionar la tecla F9
f1) Introducir los estándares de
calibración de celdas siguiendo las
instrucciones de la pantalla.
a2) Calibrar celdas.
b2) Quiere calibrar la celda "x "
c2) Si
d2) Introducir el estándar I en la celda
"x"
a3) Calibrar temperatura
b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del
equipo.
Observaciones y Limitaciones del Test:
1) En cada frasco se debe anotar su
número de laboratorio y la casilla asignada.2) Colocar los frascos hasta el fondo de
la celda.3) No aerear los frascos anaerobios.
4) Todo frasco con frotis negativo, debe
ser colocado nuevamente en el aparato.5) Ciertas variantes de H.
influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y
P. anaerobius, pueden ser sensibles al
anticoagulante ( SPS ) lo que resulta en una falta de crecimiento
o baja producción de CO2.
6) En el caso de cultivo de otros
fluidos corporales, se requiere agregar sangre
u otro suplemento al frasco si se intenta
recuperar organismos tales como H. influenzae y N.
gonorrhoeae.
7) En contadas ocasiones pueden
presentarse BacT/Alert positivos, con frotis y subcultivos
negativos, debido a una excesiva cantidad de glóbulos
blancos en la muestra de sangre.8) Se recomienda quitar del aparato,
aquellos frascos considerados positivos por el BacT/Alert,
para evitar cultivos no viables debido a autolisis,
especialmente en microorganismos fastidiosos como el S.
pneumoniae.
b) BACTEC 9240 ® :
El sistema Bactec 9240 es utilizado para la
detección temprana de microorganismos en hemocultivos por
el método de la fluorescencia.
Cada frasco contiene un sensor que puede detectar
aumentos del CO2 producido por el crecimiento de los
microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el
aumento de la fluorescencia del sensor, la que se relaciona con
la cantidad de CO2 presente.
Observaciones y limitaciones del
test:
1.. No utilice frascos con signos
evidentes de deterioro.
No utilice frascos de cultivo después
de la fecha de caducidad.Los frascos inoculados deben ponerse en el
instrumento tan pronto como sea posible.Si se ha tardado en colocar un frasco
inoculado en el instrumento, y se puede ver crecimiento, el
frasco no debe colocarse en el instrumento, sino
subcultivarse y hacer placa por Gram, considerándolo
como un frasco presuntamente positivo.Se recomienda analizar el rendimiento de cada
lote de frascos recibidos, utilizando un control positivo y
uno negativo. El frasco positivo debe inocularse con 1.0 ml
de una suspensión de E. coli o S.
aureus con un estándar McFarland de 0.5.
El control negativo está constituido por
un frasco sin inocular.
Dado que la sangre puede neutralizar la
acción tóxica del anticoagulante SPS
sobre algunas Neiserias y cocos Grampositivos
anaerobios, se recomienda utilizar volúmenes de sangre no
menores a 1.0 ml para facilitar el crecimiento.
Ciertos organismos exigentes como el H.
influenzae requieren para su crecimiento de elementos
que se encuentran en la sangre como el factor V. Si la
muestra de sangre es reducida, es posible que se requiera
agregar éstos suplementos al frasco si se sospecha de
éstos microorganismos.Puede darse casos de falso positivo en
pacientes con un conteo de leucocitos muy elevado.
c) Sistema Vitek ® :
El control de calidad , es un subsistema del
Vitek, que examina la seguridad de sus tarjetas. El control de
calidad opera similarmente a la evaluación
de exámenes clínicos: El test clínico
identifica el organismo, el examen de control de calidad valida
el test.
Realizar control de calidad a toda nueva tarjeta
de identificación o de sensibilidad, una vez se ha
recibido en el laboratorio. No se requiere ningún otro
control de calidad si todos los resultados están dentro de
los límites
esperados. Realizar control de calidad por 5 días
consecutivos si se observan resultados fuera de control.
INTERFERENCIAS :
No utilice tarjetas Viek vencidas debido a
que pueden causar resultados con lectura errónea.El mantenimiento inapropiado de las cepas
control, subcultivos y mal llenado de las tarjetas, puede
resultar en inconsistencias o bipatrones erróneos.
ALMACENAMIENTO DE LAS TARJETAS :
Las tarjetas Vitek deben ser mantenidas a 2
– 5 ºC. Si la temperatura de las tarjetas está
comprometida, las tarjetas deben ser descartadas.
Consideraciones específicas :
1. El programa de control de calidad
evalúa el kit del Vitek y los
organismos de control de calidad listados en el
paquete.
2. Las tarjetas de control de calidad
utilizan 7 dígitos ( formato : 000000-0 ) compuestos
de 2 partes:
Los primeros 6 dígitos identifican el tipo
de tarjeta y un organismo ATCC.
El séptimo dígito identifica el
número de lote y es asignado automáticamente.
3. Cada número predefinido de
referencia en el control de calidad significa un tipo
de test y un organismo. Un número de
referencia de control de calidad es más
que un número de identificación de
tarjeta. Cada uno de éstos números significa
la paridad de un tipo de tarjeta con un
organismo. Así por ejemplo el número de
referencia 900101 corresponde al Proteus
mirabilis ( ATCC 7002 ) y el 900102
a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ).
4. Un campo para control de calidad
demográfico está accesible para la información del lote de la tarjeta.5. El control de calidad provee su
propio set especial de reporte.6. El flujo de operación del
control de calidad es idéntico al flujo de una muestra
clínica.7. Los resultados de control de calidad
se transfieren de la incubadora/lector a la base de
datos, si la opción de transferir la tarjeta
finalizada está activa.8. Todos los resultados se mueven a
través del manejador de desviaciones del control de
calidad, el cual compara los resultados actuales con los
conocidos.9. El programa de control de calidad
Vitek permite ver los resultados del control en pantalla.,
los cuales aparecen en 3 diferentes formatos: Resultado de la
identificación, resultado de la sensibilidad a los
antibióticos y resultado de la identificación
de urocultivos. La pantalla nos indica :
La identificación del organismo
esperado ( ATCC ).Resultado de la identificación
actual.Lote de la tarjeta.
Fecha del test.
Fecha de expiración de la tarjeta.
Reacciones bioquímicas esperadas y de
la prueba actual. Cada uno de los test bioquímicos son
señalados tanto en lo esperado como en el resultado
actual, y se genera una lista de los test que se han desviado
del resultado esperado.Igual patrón al anterior muestra la
tarjeta de sensibilidad a los antibióticos.Todos los resultados de control de calidad
pueden ser impresos guardar en un libro récord.
10. La base de datos de los
equipos de identificación computarizados, deben
ser
frecuentemente revisados para actualizarlo en lo
referente a los cambios
taxonómicos que ocurran. Igualmente se
debe prestar atención a la información
proveniente de la casa manufacturera acerca del
producto y las
investigaciones
que con el equipo aparezcan en la literatura
especializada.
11. Los informes
de control de calidad y reporte de desviaciones, son
mantenidos en el Libro de control de calidad del Vitek.12. El sistema Vitek también
cuenta con un programa que ayuda a evaluar los resultados,
minimizando los errores de interpretación. Se trata del
bioMérieux Vitek Expert System. Los sistemas expertos
se basa en marcadores fenotípicos y el uso de
categorías de susceptibilidad ya definidas, que
interpretan los resultados basados en criterios locales y
mundiales. El sistema experto trabaja con una selección determinada de
antibióticos e implica la alimentación de
bases de
datos donde los géneros y especies bacterianas se
agrupan en fenotipos caracterizados por un perfil global de
susceptibilidad producto de mecanismos intrínsecos y
extrínsecos de resistencia a través de los
cuales se optimiza la identificación y el informe
microbiológico. Estas bases de datos se construyen
amparadas en un extenso conocimiento
de las distribuciones de las
concentración inhibitorias mínimas
(CIM) a numerosos antibióticos y los
fenotipos caracterizados dentro de cada especie
bacteriana. Cuando un perfil
fenotípico se valida se está
comparando ese perfil específico contra los perfiles
de las bases de datos, permitiendo deducir
resultados de los fenotipos observados, corregir resultados y
finalmente, realizar recomendaciones sobre las bases de un
consenso general y de acuerdo con los parámetros
internacionales que se adopten. El sistema experto ayuda a
realizar un control de calidad de los resultados de laboratorio
pues encuentra resultados inusuales y plantea, mediante alarmas,
las correcciones o verificaciones oportunas. El programa puede
detectar:
Identificaciones que son inconsistente con
los resultados de sensibilidad.Errores técnicos
Fenotipos raros o improbables.
Expresiones de resistencia incompleta.
Resistencia cruzada.
13. El sistema también permite la
adición de reglas ( CAR ) en la que se establecen
parámetros que debe cumplir el reporte antes de su
impresión.14. El nuevo sistema informático
COPERNICO, permite integrar los equipos
Vitek, BacT/ALERT y mini API, para transformar la data
analítica en valores
clínicamente útiles. El Programa trata de
superar las limitaciones del Sistema Informático del
laboratorio ( LIS ) en el campo de la
microbiología.
i ) Cepas ATCC recomendadas para control de
calidad de tarjetas de identificación y sensibilidad con
métodos automatizados :
BioMerieux Vitek® Tarjeta para
identificación de Gram Negativos (GNI) QC Set
Acinetobacter baumannii ATCC®
19606Bordetella bronchiseptica ATCC®
10580Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883Proteus
mirabilis ATCC® 7002Pseudomonas aeruginosa
ATCC® 27853Serratia odorifera ATCC®
33077Yersinia kristensenii ATCC® 33639
BioMerieux Vitek® Tarjeta para
identificación de Gram Positivos (GPI) QC Set
Enterococcus durans ATCC®
6056Enterococcus faecalis ATCC®
29212Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC®
19414Staphylococcus xylosus ATCC®
29971Streptococcus bovis ATCC® 9809Streptococcus
equi ATCC® 9528Streptococcus pyogenes ATCC®
19615
BioMerieux Vitek® Tarjetas para
sensibilidad de Gram Negativos (GNS) QC Set
Enterococcus faecalis ATCC®
29212Escherichia coli ATCC® 25922Escherichia
coli ATCC® 35218Pseudomonas aeruginosa
ATCC® 27853
BioMerieux Vitek® Tarjetas para
sensibilidad de Gram Positivos (GPS) QC
Set
Enterococcus faecalis ATCC®
29212
Enterococcus faecalis ATCC®
51299Escherichia coli ATCC® 35218Staphylococcus
aureus ATCC® 29213201-126
BioMerieux Vitek® Levaduras (YBC) QC
Set
Cryptococcus humicolus ATCC®
9949Candida albicans ATCC® 14053Cryptococcus
albidus ATCC® 34140Yarrowia lipolytica
ATCC® 9773
d) Sistema Bactec MGIT 960 ® :
El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la
detección temprana de micobacterias en especimenes
clínicos. El control de calidad del instrumento es
automático y está activo continuamente para
asegurar la operación confiable del sistema.
El reporte de control de calidad suministra una
lista del estado de todos los detectores del instrumento con la
fecha y hora de la última verificación, e incluso
la lista de las celdas bloqueadas, temperatura de cada
incubadora, estado de los sensores,
etc.
Control diario del Equipo:
Verificar la operación de las
gavetas/incubadoras y las lámparas indicadoras de
estación.Realizar test de las luces LED indicadoras (
Verde y Roja ).Chequear el termómetro apretando el
botón de test.
Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos
MGIT , se sugiere control de
calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook
7H9.
_____________________________________________
Especie ATCC Dilución 0.5 McFarland
Días para ser detectado
( Suspensión en salina )
Positivo
_____________________________________________
M. tuberculosis 27294 1:500 6 –
10
M. kansasii 12478 1:50000 7 –
11
M. fortuitum 6841 1:5000 1 – 3
Control de Calidad Negativo:
Utilice un frasco MGIT con solución
descontaminante MycoPrep kit y PANTA ( Mezcla antimicrobiana
). colóquelo en la incubadora/detector.Colocar un frasco de MGIT sin muestra y sin
descontaminante y colóquelo en la
incubadora/detector.Inocule una suspensión de E.
coli dentro de un tubo MGIT y colóquelo dentro de
la incubadora/detector.
Control de Calidad Positivo:
a. Inocule un frasco de MGIT con una
cepa control doméstica de Mycobacterium
tuberculosis o una cepa control de M. Tuberculosis
ATCC 25177 o M. Intracellulare ATCC 13950 y
colóquelo en la incubadora.b. Es importante comprobar que el agua,
reactivos de tinción, suplementos, etc, están
libres de contaminación por micobacterias ambientales
especialmente M. Gordonae y M. Terrae.
9. CONTROL DE CALIDAD EN
MYCOBACTERIOLOGÍA :
El programa de aseguramiento de la calidad en
Mycobacteriología, consta de tres componentes:
confirmación diagnóstica, rondas de
evaluación externa del desempeño e inspecciones de calidad.
La confirmación diagnóstica y las
rondas de evaluación externas del desempeño
evalúan al personal que
realiza y tiñe los frotis y al microscopista que reporta
los resultados. Esto constituye la piedra angular de la Red de laboratorios contra
la tuberculosis. La primera modalidad permite conocer los
resultados del trabajo diario del laboratorio; la segunda
modalidad evalúa al microscopista que reporta y aporta
información sobre el desempeño de toda la Red. En
éste sentido, el control de calidad se inicia con una
adecuada muestra, y el resto del trabajo a realizar depende
directamente de ésta etapa inicial.
Las inspecciones de calidad permiten conocer el
entorno en el que se desenvuelve el microbiólogo, el cual
influye directamente en la calidad del trabajo efectuado. Por lo
tanto, los tres componentes de este programa son complementarios
y conjuntamente brindan una visión integral de la calidad
del laboratorio en el diagnóstico de la tuberculosis.
Los indicadores de calidad son los porcentajes de
falsos positivos y negativos de donde se deriva la sensibilidad y
especificidad, el valor
predictivo positivo y negativo y la concordancia. Recomendamos el
seguimiento del protocolo de
trabajo de la Red Nacional.
Por otro lado, los nuevos métodos de
amplificación del ADN para detectar
m. tuberculosis, se han incrementado como un arma más del
laboratorio en su diagnóstico. Sin embargo, la
sensibilidad y especificidad de éstas pruebas ha
sido cuestionada, como la falta de reactivos estándar para
su control de calidad, por lo que se recomienda tomar las medidas
de control requeridas.
10. CONTROL DE CALIDAD EN MICOLOGÍA
:
El Control de calidad en micología a
tomado gran impulso gracias entre otras cosas, por el interés de
las empresa
productoras de materiales de laboratorio, por incursionar en un
campo aún en desarrollo.
Asi como ejemplo, las siguientes marcas realizan esfuerzos en
métodos para antifungigramas :
Sensititree ( Izasa )
Fungitest ( BioRad )
ATB-Fungus ( Biomerieux )
Candifast ( Oxoid )
E-Test
Algunas cepas control ATCC para micología
son :
C. albicans ATCC 14053
C. albicans ATCC 60193
C. albicans ATCC 90028
C. tropicales ATCC 66029
C. parapsilosis ATCC 22019
C. krusei ATCC 6258
Aspergillus Níger ATCC 10428
C. glabrata DMS 70614
Mucor racemosus ATCC 42647
Penicilium commune ATCC 10428
Saccharomyces cereviseaea ATCC 9763
Geotrichum candidum DMS 1240
Microsporum gallinae ATCC 12108
a) Control de calidad de tinciones en
micología :
Tinta China
Cryptococcus albidus : Presencia de
cápsula
C. albicans : Negativo por cápsula
b) Hidróxiodo de potasio
Combinar con una muestra de esputo para confirmar
que se disuelve
c) Lactofenol – azul de algodón
Penicillium sp : Se observa la pared celular de
azul intenso
d) Calcoflúor
Candida albicans : Color azul brillante o
verde
Control negativo : KOH mezclado con el blanco del
calcoflúor
b) Control de calidad de procedimientos de
identificación en micología :
a) Tubos germinales
Candida albicans ATCC 60193 : Control positivo.
Tubos germinativos.
Candida tropicales ATCC 66029 : Control negativo.
Ausencia de tubos
germinativos
b) Perforación de cabello
Trichophyton mentagrophytes : Control positivo.
Perforación del cabello
Trychophiton rubrum : Control negativo. Ausencia
de perforación
c) Conversión dimórfica
Histoplasma capsulatum :
Crecimiento/conversión a levadura
Sin inóculo : No crecimiento
d) Termotolerancia
Aspergillus fumigatus : Control positivo.
Crecimiento a 45-50°C
Aspergillus flavus : Control negativo. Ausencia
de crecimiento
c) Control de calidad de pruebas
bioquímicas en micología :
Levaduras – Asimilación de
carbohidratos
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231 No
crecimiento
Celobiosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Galactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Glucosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Inositol Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Lactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Maltosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Sucrosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Trehalosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803
Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Levaduras – Fermentación de carbohidratos
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231
Negativo. No gas
Celobiosa Candida lusitaneae ATCC 34449 Positivo.
Gas.
Galactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo.
Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No
gas
Glucosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo.
Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No
gas
Lactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No
gas
Maltosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo.
Gas
Candida kefyr ATCC 2512 Negativo. No gas
Sucrosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Candida krusei ATCC 6258 Negativo. No gas
Trehalosa Candida tropicales ATCC 13803 Positivo.
Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No
gas
d) Control de calidad de medios de cultivo en
micología :
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Agar extracto de arroz Candida albicans ATCC
10231 Crecimiento. Clamydosporas
Candida krusei ATCC 6258 Crecimiento.
No clamydosporas
Urea de Christensen Cryptococcus neoformans ATCC
66031 Positivo. Rosado
Candida albicans ATCC 60193 Ausencia de color
Agar dermatofitos Trichophyton mentagrophytes
ATCC 9533 Crecimiento.
Rojo.
Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento
escaso
Aspergillus Níger ATCC 16404
Inhibición
Sabouraud dextrosa agar Candida albicans ATCC
10231 Crecimiento
Mycosel Candida albicans ATCC 10231
Crecimiento
e) Control de calidad de pruebas comerciales
de identificación en micología :
PRUEBA MICROORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Vitek ID-YST® Candida tropicales ATCC 201380
Identificación correcta
Candida kefyr ATCC 4135
Candida magnoliae ATCC 201379
Candida membranaefaciens ATCC 201377
Trichosporon mucoide ATCC 201382
API ID 32C® Candida glabrata ATCC 64677
Identificación correcta
Candida guillermondii ATCC 6260
Cryptococcus humicola ATCC 64676
Candida krusei ATCC 6258
BactiCard Candida® Candida albicans ATCC
10231 Identificación correcta
Cryptococcus neoformans ATCC 32045
RapID Yeast Plus System® Candida kegyr ATCC
2512 Identificación correcta
Candida glabrata ATCC 2001
MicroScan Rapid Yeast ID® Candida albicans
ATCC 66027 Identificación correcta
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus unigutulatus ATCC 66033
11. CONTROL DE CALIDAD DE FORMULAS LACTEAS
y
MAMADERAS :
El control de calidad de las fórmulas
lácteas y mamaderas se realiza como un servicio al
Departamento de Neonatología del hospital.
Básicamente éste control consiste en un recuento
bacteriano de bacterias mesófilas y recuento de bacilos
coliformes.
Consideraciones referentes al control de
calidad:
Mantener control sobre la esterilidad de los
platos Petri y las pipetas.Si al calentar los tubos para diluir el agar
base o el Red Bile presentaran turbidez, descartar ya que es
signo de contaminación del medio.Es preferible no mezclar por inversión la leche para
homogenizar, ya que se puede salpicar la parte interna de las
mamaderas y si hubiera contaminación de la leche,
ésta se puede extender a la mamadera.Servir 1.0 ml de la leche en un frasco con 50
ml de fosfato dipotásico estéril para hacer una
dilución 1:100. Traspasar 1.0 ml de la dilución
a 2 platos Petri.Traspasar el mamón a un frasco con
fosfato dipotásico estéril. Mezclar. Traspasar
1.0 ml de la dilución a cada uno de 2 platos Petri
esteriles.Evitar servir los medios muy calientes al
plato Petri con la muestra, ya que se pueden matar los
gérmenes potenciales. Una temperatura de
aproximadamente 30-40 °C es apropiada, sin dejar coagular
el agar.Mezclar homogéneamente el agar y la
muestra rotando el plato y sin permitir la formación
de coágulos.Incubar a 35ªC por 24 horas. Al final de
la incubación se realiza la
lectura, en la que si hay colonias en la fórmula,
se deben contar las colonias y multiplicar por 100. En el
caso del mamón, las colonias se multiplican por
50.Las fórmulas lácteas solo
pueden guardarse en refrigeración por un máximo de
48 horas antes de ser procesadas.En condiciones normales la leche y las
mamaderas deben ser estériles.Si repetitivamente se observa
contaminación de la leche, solicitar a las
nutricionistas encargadas de la supervisión de la preparación de
las fórmulas, una muestra de leche en polvo para un
cultivo directo y una muestra de agua, si fuera
necesario.
NOTA: Solo como referencia se describen
los grados de leche pasteurizada
establecidos en Panamá,
mediante el decreto # 522 de 1957
Grado A : No debe exceder de 30,000 col/ ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
Grado B: No debe exceder de 50,000 col/ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
NOTA : Recomendamos utilizar este
método como base si se requiere hacer control de calidad
de Componentes de Nutrición Enteral,
para pacientes incapacitados de recibir sus requerimientos
nutricionales por vía oral.
Ref. Calidad microbiológica de una
fórmula entera lista para usar.
Rev. Chil. Infect.Vol.21, No.4, Dic 2004.
12. CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DESTILADA
:
El agua destilada utilizada en la
preparación de medios de cultivos y para reconstituir
reactivos, debe tener un control de calidad básico que
incluye los parámetros químicos y bacterianos. A
continuación se describe un método cualitativo y
muy práctico para su evaluación.
Control de Calidad Químico :
Este control puede ser realizado teniendo en
cuenta una gran variedad de parámetros a evaluar, tales
como :
Ph
Conductividad
Olor
Color aparente
Turbidez
Alcalinidad
Dióxido de carbono
Dureza
Iones
Cationes
Metales pesados
Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar
un estudio profundo, recomendamos el siguiente método
sencillo y apropiado para determinar la calidad del agua, aparte
de la determinación de su Ph ( 5.0
– 5.5 ).
Reactivos:
a) Solución Acuosa de Nitrato de plata (
NO3Ag )
NO3Ag ……… 5.1 g
Agua destilada ………… 300 ml
b) Acido Nítrico
Método:
Colocar en un vaso químico limpio :
10 ml de agua destilada a examinar
2 gotas de ácido nítrico
1 ml de Solución de NO3Ag
Evaluación:
El agua deberá continuar completamente
clara. Si aparece una ligera turbidez
blanquecina, indicará que la calidad es
deficiente.
Ref: manual de
Técnicas Básicas OPS/OMS N° 439,
pag. 58
Control de Calidad Microbiológico del
Agua destilada:
1) Agregar 1 ml de agua destilada a
examinar, a un tubo de Tioglicolato.2) Agregar 1 ml de agua destilada a
examinar a un plato de agar sangre.3) Incubar a 35.5 °C por 4
días.4) Llevar un libro récord del
control de calidad del agua.
13. CONTROL DE CALIDAD DE LA SANGRE DE CARNERO
.
Al ser recibida la sangre de carnero, se debe
anotar los siguientes datos :
Fecha de recibo
Fecha de colección
Fecha de expiración
Número de lote
Aspecto ( Ej. Si hay evidencia de
hemólisis ).Hematocrito
Cada botella de sangre de carnero, debe ser
evaluada por esterilidad. Para ello recomendamos utilizar
botellas de hemocultivos del Sistema Bactec o el BacT/Alert.
Identificar la botella con el número
del lote de la sangreCon una jeringuilla obtener 2.5 ml de la
botella o bolsa con sangre de manera aséptica y
colocarla en la botella de hemocultivo.Colocarla en el sistema automatizado
inmediatamente.
La botella o bolsa origina de sangre ha de ser
colocada en refrigeración de inmediato.
Después de su uso durante la
preparación del medio, una pocas gotas de sangre son
colocadas en un plato de agar sangre e incubadas por 48 horas a
35ºC , para determinar contaminación durante la
manipulación.
Los resultados de control de calidad de cada lote
de sangre son guardados para llevar control de la calidad de
sangre proporcionada por el proveedor.
EL CEPARIO
:
Los sistemas de Validación son los
procesos que se requieren para asegurar que los parámetros
de funcionamiento de los test, tanto comerciales como los de uso
domésticos, son los esperados y las pruebas pueden ser
utilizadas como métodos de diagnóstico en el
laboratorio. La mayoría de los procedimientos en
Microbiología Clínica, dependen de que los
microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener
sus características morfológicas ,
fisiológicas y que sean típicas y reproducibles.
Para ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control
de Calidad, son un componente esencial de un proceso de
validación.
Existen varias colecciones de cepas utilizables
para el control de calidad. Algunos ejemplos son:
ATCC : American Type Culture Collection-
Rockville, USA
NCIC : National Collection of Industrial
Bacteria- Survey, Inglaterra
JFCC: Japanese Federation of Culture
Collection of Microorganism- Japón
CCTM : Colección Nacional –
Lille, Francia
RIA: USSR Reseach Institute for
Antibiotics- Moscú, Rusia.
NCIB : Colección Nacional
industrial – Aberdeen, Escocia
DSM : Deutsche Sammlung von
Mikroorganismen – Gottinger, Alemania.
Así, la E. coli ATCC 25922 es
igual a la DSM 1103 y a la NCIB 12210.
Los organismos que han de ser utilizados en el
control de equipos o sistemas de identificación,
generalmente son estipulados por los fabricantes o bien escogidos
por el
usuario. Generalmente se utilizan cepas de
referencia como las ATCC y si son cepas domésticas, es
necesario tener un historial del organismo que incluye nombre,
área de aislamiento, reacciones bioquímicas y
patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de
almacenaje, fecha de último transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener
requisitos específicos:
Características típicas.
Características estables.
Reproducibilidad
1. Métodos de Conservación de
Cepas Bacterianas:
Los métodos de conservación de las
cepas estándar de control de calidad, deben asegurar que
las mismas mantengan sus características típicas y
que puedan ser reproducidas después. El medio utilizado
para su conservación debe mantener un mínimo de
mutaciones. Estas mutaciones pueden evitarse permitiendo
también el mínimo crecimiento del microorganismo y
aportando óptimas condiciones ambientales para su
sobrevivencia, con el menor número de subcultivos
Para una mejor clasificación de los
métodos de conservación de cepas, los dividiremos
en tres categorías: Cultivos Stock, Semistock y Cultivos
de Trabajo.
a) Cultivos Stock:
Estos representan el verdadero " Banco de
Cultivos" . Estos son mantenidos en un sistema cerrado de
conservación, minimizando su actividad genética y
fisiológica,
para evitar su potencial mutación. Los dos
más importantes métodos para conservación en
Stock, son la Liofilización y el Ultracongelamiento.
LIOFILIZACION: Se hace una
suspensión fuerte de un cultivo puro y joven en leche
estéril o similar, y se coloca en tubos con rosca y se
siguen las instrucciones del aparato liofilizador, que puede ser
tan sencillo como un simple bomba de vacío, hasta un
sofisticado sistema. Durante este proceso evitar
que el cultivo se derrame dentro el aparato liofilizador y la
formación de aerosoles
Este sistema tiene la ventaja de ser el que
permite la sobrevivencia por un mayor periodo de tiempo y mayores
facilidades para el transporte de
las cepas.
ULTRACONGELAMIETO: Hacer una
suspensión fuerte de la colonia pura en caldo Brucella
conteniendo 15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de
0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo
profundo del congelador a -45°C..
También se puede utilizar la
modificación de Ultracongelamiento en Nitrógeno
líquido, que consiste en colocar en una ampolla
especial dentro de un aparato específicamente designado
para el mantenimiento de cepas en nitrógeno
líquido.
Ambos sistemas preservan las bacterias por largos
periodos de tiempo.
b) Cultivos Semistock:
Este término se refiere al mantenimiento
de cultivos por un periodo intermedio entre el relativamente
permanente cultivo en Stock y el cultivo de cepas control para
el trabajo
diario. De las 5 técnicas listadas a continuación,
solo la de congelamiento es utilizable para el mantenimiento de
cepas de anaerobios.
b1) Congelamiento en congelador convencional
:
Los congeladores convencionales pueden mantener
una temperatura entre
-10 a –25°C. Los cultivos se preparan
de la misma manera como en el caso de la ultracongelación
y son colocados en el congelador. El método permite la
sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por
años y en la mayoría de las veces por al menos de 6
a 12 meses.
b2) Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo
Cisteína- Tripticasa y Soya agar.
Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18
a 24 horas para obtener un crecimiento moderado, afloje la tapa y
mantenga a temperatura ambiente o preferiblemente en
refrigeración, si es posible en la oscuridad.
Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año
y los fastidiosos por 6 meses.
b3) Secado en discos con gelatina:
Este método es conocido también
como método Stamp en honor de su creador. Corte
pequeños círculos de papel encerado y
colóquelo en un plato Petri de vidrio. Esterilice en
autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión.
Prepare una suspensión de caldo nutriente
con 10% de gelatina en polvo
( Peso por Volumen ) y 0.25%
de ácido ascórbico ( P x V ) y dispense en
tubos con rosca y esterilice en autoclave.
Haga una suspensión fuerte de un cultivo
puro y joven y coloque una gota del
mismo con una pipeta estéril sobre uno de
los discos de papel acerado
estéril en un plato Petri. Con una pinza
estéril, transfiera el disco a un
desecador de vacío conteniendo
Pentaóxido de fósforo. Evacue el desecador
con la bomba de vacío. Cuando el disco
está seco, asépticamente introducir
en un tubo estéril con tapa de rosca y
colocar en el refrigerador.
Para hacer un subcultivo del disco,
asépticamente retire un círculo de papel
con las colonias y colocarlo en un tubo
conteniendo un caldo de cultivo e
incubar por 24 horas a 35C y luego hacer
transplante a agar sangre e incubar
nuevamente.
b4) Conservación en medio de cultivo
inclinado con aceite mineral:
Es un método especialmente utilizado para
hongos, pero es útil también para algunas
bacterias.
En el caso de los hongos, se utiliza un cultivo
joven y bien esporulado en un medio de cultivo inclinado, tal
como agar de Sabouraud-dextrosa. Cubrir completamente con aceite
mineral estéril. El aceite debe ser esterilizado a 15
libras de presión por 45 minutos, para asegurar su
esterilidad absoluta.
Para reactivar la cepa, colocar la boca del tubo
cerca de la llama de un mechero o incinerador y remueva una
porción visible de crecimiento con una asa estéril
larga o una aguja.
Este método permite la sobrevivencia por
muchos años.
Si el método se va a utilizar para
conservar bacterias, se utiliza Agar de Cerebro–Corazón o
agar Mueller-Hinton suplementados con hemoglobina al 2% e
Isovitalex al 1%. Los medios se sirven en tubos con rosca. Se
esterilizan y luego se les hace coagular en forma inclinada.
Las bacterias son inoculadas en el medio e
incubadas a 35°C por 24 horas, tomando en cuenta sus
requerimientos de oxígeno. Luego las cepas son cubiertas con
aceite mineral estéril, hasta 1 cm por encima del final
del inclinado. Los cultivos son viables por 2 años a
temperatura ambiente.
b5) Mantenimiento en tierra
estéril:
Es utilizado primeramente para hongos y bacterias
esporuladas.
Esterilice en autoclave tierra suelta en tubos
con rosca a 15 libras de presión por 1 hora. Haga una
suspensión fuerte del microorganismo joven y esporulado y
colóquelo en el tubo con tierra estéril. Deje secar
y colocarlo en un refrigerador.
b6) Cultivos de trabajo diario:
Los cultivos control para el trabajo diario, son
una forma conveniente para realizar el control de calidad de
pruebas de uso frecuente y que requieren una lectura comparativa
al momento de su lectura. Tal es el caso de las pruebas de
coagulasa y oxidasa, entre otras. Para éste
propósito se utilizan cultivos de 24 horas y son
transplantados diariamente.
Bacterias resistentes:
Tal es el caso de Estafilococos y
Enterobacteriaceas. Se transfiere una colonia joven de un cultivo
en Stock o semistock y se transfiere a un tubo con agar nutritivo
inclinado e incubar por un mínimo de tiempo tal que haya
crecimiento. Guardar en refrigerador. Los cultivos para trabajo
diario, son transferidos a otros tubos de agar inclinado cada mes
por un intervalo de 6 meses. Después de éste
tiempo, se debe volver a hacer otro pase del cultivo stock.
Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos
delicados como
N. meningitidis, N. gonorrhoeae, S.
pneumoniae y algunos menos delicados como el S.
pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por
24 horas en medios apropiados como agar chocolate en ambiente de
CO2 , para luego ser colocados en refrigeración.
Después de una serie de 6 transplantes consecutivos, se
debe preparar otro cultivo para uso diario a partir de la cepa en
stock.
Bacterias anaeróbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la
mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser
mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con
0.5% de carbonato de sodio adicionado
después de esterilizar por autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y
guardados a temperatura ambiente.
Hongos:
Los cultivos de uso diario de hongos, son
mantenidos en tubos con agar Sabouraud o sustituto.. Los cultivos
se incuban a temperatura ambiente hasta que haya crecimiento, y
ocurra la esporulación, para luego ser colocados en
refrigeración. Los cultivos de trabajo deben ser
transferidos cada 2 meses . Pasado éste tiempo se debe
preparar otro cultivo de trabajo a partir de la cepa en
stock.
Cultivos de trabajo comerciales:
Son preparados por casa comerciales utilizando
cepas conocidas como la ATCC.. Estas son estables en
refrigeración por un año. Tal es el caso de
Bact-Chek de Roche Diagnostics, Bactrol Disk de Difco, entre
otras.
Para reactivar las cepas se colocan en un caldo
nutritivo como el caldo de Tripticasa y Soya e incubados por 24
horas a 35°C. Luego se hace un transplante a un medio de
enriquecimiento o a agar sangre.
Almacenamiento de cepas VISA / VRSA
:
Si el laboratorio detecta alguna cepa de
Estafilococo aureus sospechosa de ser VISA ó
VRSA, se recomienda congelar la cepa a -60 °C / -70°C en
medio líquido estándar con 15% de glicerol. Si no
se cuenta con el congelador, se puede colocar una cepa
recién sembrada en un tubo inclinado con tapa de rosca
conteniendo medio inclinado de TSA . Incubar a 35°C por 24
horas y luego apretar la tapa de rosca y mantener el tubo a 2
– 8°C. Repetir el subcultivo y todo el proceso, para
mantener un mínimo de almacenamiento.
2. Mantenimiento del Cepario:
Se debe tener especial cuidado en el
mantenimiento del cepario, ya que el mismo constituye una ayuda
importante en la validación de equipos, materiales,
reactivos y habilidad del personal. Debe existir un programa
metódico de transplantes de cepas , archivo de cada
uno de los cultivos con sus características
bioquímicas, sensibilidad a los antibióticos,
origen de la cepa, método de identificación, fecha
de siembra y próximo transplante, etc
3. Cepas ATCC:
Manuales |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Número de pruebas |
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BIOSEGURIDAD |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Procedimientos seguros |
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Vestimenta |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Equipo de protección |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Descarte de desechos |
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|
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
TECNICAS DE TRABAJO |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Habilidad |
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Procedimientos validados |
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PERSONAL |
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Número de |
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| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Turnos |
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Observaciones : |
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LABORATORIO CLÍNICO,
CHMDrAAM,CSS
CONTROL DE CALIDAD EN
MICROBIOLOGÍA
REPORTE DE CONTROL DE
CALIDAD DE MEDIOS DE
CULTIVO, SANGRE Y
SUPLEMENTOS
REPORTE DE NO CONFORMIDAD
PRODUCTO :
a) Medios de cultivo en plato
b) Medios de cultivo e
identificación en tuboc) Medios líquidos
d) Sangre de carnero
e) Sangre humana
f) Suplementos
g) Autoclave
h) Otros
Fecha de producción :
Fecha de reporte de control de calidad
:
Reporte de control de
calidad :
——————————————————————-
Firma :
G-
GLOSARIO DE
TERMINOS
a) GLOSARIO DE TERMINOS DE CALIDAD :
1. Administración de la Calidad
Aspecto de la función
general de la gestión
que determina y aplica la Política de la
Calidad.
2. Aseguramiento de la Calidad
Conjunto de acciones
planificadas y sistemáticas que son necesarias para
proporcionar la confianza adecuada de que un producto
satisfará los requisitos de calidad esperados.
3. Auditoría de calidad
Examen metódico e independiente que se
realiza para determinar si las actividades y los resultados
relativos a la calidad satisfacen las disposiciones previamente
establecidas, y para comprobar que estas disposiciones se llevan
realmente a cabo y que son adecuadas para alcanzar los objetivos
previstos.
4. Calibración
Conjunto de operaciones
encaminadas a determinar el valor del
error de medida de un instrumento de medida.
5. Calidad
Conjunto de propiedades y características
de un producto o servicio que
le confieren su aptitud para satisfacer unas necesidades
expresadas o implícitas.
6. Especificación
Documento que establece los requisitos con los
que un producto debe estar conforme.
7. Incertidumbre
Valor del intervalo, dentro del cual se encuentra
con alta probabilidad
el valor real de la magnitud medida.
8. Inspección
Acción de medir, examinar, ensayar o
verificar una o varias características de un producto y de
compararlas con los requisitos especificados, con el fin de
establecer su conformidad.
9. Instrucciones de trabajo
Describen las operaciones que hay que realizar en
cada proceso o en
cada puesto de trabajo. Es un
conjunto muy amplio de documentos que
debe ser revisado cada vez que se modifica un proceso o un
método de
trabajo.
10. Instrumento de Medida
Equipo empleado para indicar la magnitud que se
quiere controlar.
11. Manual de
calidad
El manual de Calidad es un documento que,
debidamente autorizado, formaliza la Política de la empresa
relativa a la Administración de la Calidad, definiendo
las normas y los
procedimientos
operativos de referencia, los objetivos de calidad, el sistema de
responsabilidad y las normas internas. Se trata de
una recopilación estructurada de todas las normas, los
criterios, las instrucciones y las recomendaciones que aseguran
la calidad del bien o servicio, teniendo como fin los objetivos
fijados por la Dirección.
12. No conformidad
Falta de cumplimiento de los requisitos
especificados.
13. Periodo de calibración
Es el plazo de tiempo
definido para un equipo, durante el cual el instrumento se
encuentra en estado de
uso.
14. Política de Calidad
Directrices y objetivos generales de una empresa,
relativos a la calidad, expresados formalmente por la
Dirección General.
15. Procedimiento
Forma específica de llevar a cabo una
actividad.
16. Reclamación
Queja oral o escrita relativa a problemas de
Calidad, realizada por un Cliente en base a
una No Conformidad detectada.
17. Registros
Documento que proporciona evidencia objetiva de
actividades realizadas o de resultados obtenidos.
18. Revisión del Sistema de
Calidad
Evaluación formal, realizada por la
Dirección, del estado en que se encuentra el Sistema de
Calidad y de su adecuación a lo que establece la
Política de Calidad y a los nuevos objetivos que se
deriven de la evolución de circunstancias cambiantes.
19. Sistema de Calidad
Conjunto de la estructura de
organización, de responsabilidades, de
procedimientos, de procesos y de
recursos que se
establecen para llevar a cabo la
Administración de la Calidad.
20. Trazabilidad
Capacidad para reconstruir el historial de la
utilización o la localización de un artículo
o de una actividad, mediante una identificación
registrada.
b) GLOSARIO DE TERMINOS ESTADISTICOS:
1. Azar: Condición de desorden sin
predicción de los resultados individuales.
2. Coeficiente de Confianza:
Oportunidad que tiene un intervalo de confianza de ser
incluido en el valor universal.
3. Desviación Promedio: Es
la desviación dividida por el número de
determinaciones. Es un método que permite determinar
la magnitud de la desviación estándar cuando se
corren muchas pruebas.
4. Desviación
Estándar: Raíz cuadrada del promedio de las
desviaciones al cuadrado de una media aritmética.
5. Distribución de Frecuencia: Agrupa
los
valores de una variable en orden de tamaño.
6. Distribución Normal:
Distribución de datos en una
frecuencia de tabulación que semeja una curva de
campana.
7. Duplicados: Unidad o
espécimen que se ha producido bajo las mismas
condiciones.
8. Exactitud: Desviación
de un valor estimado, del valor real.
9. Especificidad :
Confirmación que un determinado procedimiento
ha sido repetidamente verificado, habiéndose obtenido
los resultados esperados.
Especificidad = Verdaderos (-) / ( Falsos(+) +
Verdaderos (-) ) X 100
10. Error Experimental:
Desviación del valor esperado, debido a las
limitaciones de la metodología o de la
producción.
11. Error Relativo: Error medio
en una serie de pruebas, que representan un porcentaje del
valor verdadero.
12. Error Estándar: Error
alrededor de la media de una serie de pruebas.
13. Error medio: Diferencia entre
el resultado verdadero y la media obtenida.
14. Error mayor ( error mayor ) :
Cuando por un método o sistema a evaluar se informa un
resultado que al compararse con un método de
referencia resulta ser completamente distinto.
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