El Melanoma Maligno es un cáncer cutáneo
grave, cuya frecuencia ha aumentado rápidamente en los
últimos años. Debido al éxito limitado de la
quimioterapia en el tratamiento del Melanoma nos propusimos
demostrar la acción del Piroxicam, un
analgésico no esteroide, sobre el Melanoma B 16F1, tumor
experimental ampliamente utilizado en el estudio de células cancerosas, para lo
cual nos planteamos la hipótesis de que el
Piroxicam administrado a ratones hembras de la cepa C57BL/6
inoculados con Melanoma B16F1 ejerce una acción antitumoral.
Se utilizaron 33 ratones hembras de la cepa C5713L]6 distribuidos
en dos grupos, un grupo tratado durante un mes
con una dosis diaria de Piroxicam de 8 mg/kg y un grupo control el cual recibió una
solución de agua destilada más el
vehículo de la droga utilizada. Los
resultados obtenidos se analizaron mediante la prueba "t"
de Student. Se demostró el Piroxicam no inhibió el
desarrollo del Melanoma B16F1;
por el contrario aumentó el crecimiento diario del tumor
primario in situ" y las dimensiones del tumor primario "in
situ" y las dimensiones del tumor primario disecado, debido
probablemente al efecto inhibidor de las prostaglandinas sobre la
replicación celular del Melanoma B 16F1. Concluimos con
estos resultados que el Piroxicam estimula el desarrollo del
Melanoma Bl6F1 en ratones hembras de la cepa C5BL/6.
Palabras clave: Melanoma B16F1, Melanoma experimental,
Tumor, Piroxicam Cepa C57BL/6.
Abstract
Piroxicam action on female mice C57BL/6 with Melanoma
B16Fl.
The Malignant Melanoma is a serious cutaneous cancer, its frequency has rapidly
increased in the last years. Because the limited success of the
chemotherapy in the tretment of the Melanoma we proposed to
demonstrate the action of Piroxicam, a non-esterioid analgesic,
over the Melanoma Bl6Fl, an experimental tumor widely used in the
study of cancer cells. We proposed the hipothesis that Piroxicam
administrated in female mice of C5713L/6 inoculated with melanoma
Bl6Fl has an antitomural action. We used 33 female mice of
C57BL/6 divided in two groups; one group was treated with a daily
dose of Piroxicam (8m/kg) and control group that received
destilated water solution with adition of the vehicle of the drug
administrated. The results were anailzed using the Student "t"
test. It was demonstrated that
Piroxicam did not inhibit the development of Melanoma B l6F1. It
increased the daily growing "in situ" of the primary tumor and
the extension of primary tumor disected, probably because of the
inhitory effects of the prostaglandines over the ceil replication
of tile MelanomaBl6Fl. We conclude with these results that
Piroxicam stimulates the Melanoma Bl6F1 development in female
mice C57BL/6. Key words: Melanoma B16F1, experimental melanoma,
tumor, piroxicam, strain C5713U6.
Las enfermedades cutáneas son muy comunes
en el ser humano. Las detectadas con mayor frecuencia son las
afecciones de las glándulas sebáceas, la dermatofitosis
seborreica, dermatitis atópica, el
eccema, la ictiosis y los tumores cutáneos benignos y
malignos (Stern, 1988). De estos últimos el Melanoma
Maligno, se considera la forma más grave. Este Melanoma
Maligno, se considera la forma más grave. Este Melanoma
deriva de los melanocitos presentes en la capa de células
basales dela epidermis (Katz, 1990) y su aparición está
asociada con una intensa e intermitente exposición a la luz solar ultravioleta (Rieber y
Rieber, 1993).
El Melanoma Maligno es un tumor típico de la edad
avanzada (Bartkowiak et al., 1991). Su comportamiento es impredecible
y su pronóstico es reservado (Markowitz et al.,
1991).
El tratamiento del cáncer consiste en la
erradicación de las células tumorales del cuerpo, para
lo cual existen cuatro instrumentos fundamentales como son la
cirugía, la radioterapia, la bioterapia y la quimioterapia
(Longo, 1990). En el tratamiento quimioterápico de los
procesos malignos sé
emplean las drogas citotóxicas;
éstas son drogas de baja especificidad
antineoplásica, ya que su acción también se
extiende a las células normales del organismo (Litter,
1986).
Para estudiar la quimioterapia antineoplásica se
utilizan modelos tumorales en animales de
experimentación.
Los tumores desarrollados espontáneamente o
inducidos químicamente ofrecen la ventaja de poder ser reproducidos en
varias copias inéditas las cuales pueden ser tratadas con
drogas (Giovanella y Fogh, 1985). El Melanoma B16F1 es un
sistema tumoral experimental
usado para estudiar las propiedades de las células
cancerosas. Se originó espontáneamente en la cepa
C57BL/6; se caracteriza por poseer poco potencial
metastático a nivel pulmonar y gran selectividad para crecer
rápidamente (Schirrmacher, 1985).
Existe una asociación entre el sexo del huésped y el
crecimiento tumoral de Melanoma Maligno; sin embargo, los
reportes son contradictorios. En humanos se ha observado
tendencia aumentada de la enfermedad en mujeres y mayor riesgo de tener cáncer
secundario en mujeres con Melanoma que en hombres (Gutman et aL,
1991). Markowitz et aL (1991) han señalado una predominancia
leve en los hombres y mayor probabilidad de morir en el sexo
masculino que en el femenino. Estas diferencias entre hombres y
mujeres con Melanoma Maligno se han atribuido a mecanismos
hormonales. Por lo que se ha sugerido que este tumor es hormono –
dependiente (Markowitz et aL, 1991).
En 1976, Proctor et al, demostraron una clara
relación entre la función hormonal de ovarios
intactos y el lento crecimiento "in vivo" del Melanoma B 16, al
observar que después de la ovariectomìa de ratones
hembras C57B116, el crecimiento tumoral es más rápido
que en los ratones hembras no sometidas a ovariectomìa.
Estos resultados permitieron sugerir que las hormonas sexuales femeninas
suprimen el crecimiento tumoral del Melanoma B16.
Existe una relación entre los tumores
neoplásicos y las prostaglandinas (Bennett, 1975; Jaffe 1974
citados por Reddy et al., 1987; Lau et al, 1987). Debido a que
los analgésicos anti-inflamatorios no esteroides (AINE)
actúan inhibiendo la síntesis de prostaglandinas,
el efecto de estas drogas sobre los tumores ha sido objeto de
investigación.
En diferentes estudios se ha demostrado el efecto
beneficioso de los AINE especialmente aspirina, indometacina y
Piroxicam en la terapia de una variedad de tumores, tanto en
humanos como en animales de experimentación (Fulton, 1984;
Lala et al., 1986;Young y Hoover, 1986 citados por Valdez y
Perdigón 1991;Reddy et al., 1987).
El Piroxicam es un AINE con gran capacidad para inhibir
la síntesis de prostaglandinas (Carty et al., 1980). En
trabajos realizados por varios autores se ha demostrado la
acción antitumoral del Piroxicam sobre tumores
gastrointestinales, cáncer de colon y fibrosarcoma (Nigro et
aL, 1986: Reddy et aL, 1987; Northway et aL, 1990; Valdez y
Perdigón 1991). Ante la necesidad de investigar y hallar
drogas con efectos tóxicos sobre las células sanas, nos
propusimos demostrar la acción del Piroxicam sobre el
Melanoma B 16F 1 en ratones hembras de la cepa
C57BL/6.
Se utilizaron 33 ratones hembras de la Cepa C57BL16, con
peso aproximado de 18 gr. y de 8 semanas de edad, los cuales
fueron obtenidos del Laboratorio de
Farmacología y Toxicología de la
Facultad de Medicina. Para conservar sus
endogamicidad se aparearon parejas de hermanos a partir de 50
parejas obtenidas originalmente del Jackson Laboratory Mainer
(USA) a través del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas
(WIC) en el alo 1977.
Los animales seleccionados se distribuyeron en 2 grupos,
uno formado por 17 ratones hembras tratados con Piroxicam y otro
formado por 16 ratones hembras como grupo control Se ubicaron en
jaulas y fueron alimentados durante el experimento con ratarina
granulada y agua "Ad libitum".
El primer día del experimento los ratones del grupo
tratado comenzaron a recibir por vía intraperitoneal una
dosis diaria de Piroxicam de 8mg/kg de peso, preparado en
solución acuosa de bicarbonato de sodio 0.1. N (Northway
et., 1990), a una concentración de 0.16 mg de Piroxicam / ml
de solución. De la misma forma los animales del grupo
control comenzaron a recibir desde el primer día del
experimento una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0.
1N.
Una semana después de iniciado el experimento, los
animales de ambos grupos fueron inoculados con 50.000
células y viables de melanoma B 16F1 (Fidler y Nicolson,
1976; Hart y Fidler, 1980) en la pata derecha mediante
inyección intramuscular siguiendo la técnica de
exclusión de Axul Trypan (Malavé, 1978 citado por
Urbina de V, 1980).
Para la recolección de los datos a partir del día de
inoculación se midió diariamente el diámetro dela
pata derecha de los animales en el sitio de la inyección con
un vernier metálico, hasta
el último día del experimento. Tres semanas
después de la inoculación se sacrificaron los animales
de ambos grupos (Hart y Fidler, 1980; Kimura y Xiang, 1986)
mediante sobredosis de cloroformo y se disecó el tumor
primario de cada animal. A los tumores primarios se les
determinó el peso en gramos, utilizando balanza electrónica. El volumen tumoral se calculó
en ml, sumergiendo el tumor en una probeta de 50 ml con agua
destilada, correspondiendo el volumen tumoral desplazado por el
tumor (Wood, 1954; citado por Urbina de V, 1980). Para
determinar el diámetro geométrico se midió el
largo, el ancho y el alto del tumor con un vernier: el
diámetro geométrico se calculó como la raíz
cúbica del producto de las medidas
obtenidas (Stackpole et. al., 1991).
Con respecto al peso de los animales, en el grupo de
ratones hembras tratados, el peso inicial promedio fue de 18.23 +
2.26 g y el peso final promedio fue de 19.08 +1.91 g con
diferencia de 0.85g la cual no fue estadísticamente
significativa ("t" de Student:-1.187 P<0.05).
Para analizar la diferencia en el crecimiento del tumor
primario 'in situ" entre ambos grupos de animales, se
comparó el promedio del diámetro correspondiente a los
días 7, 14 y22 de tratamiento post inoculación. El
día 7 el diámetro de la pata file 3.18 + 0.26 mm y 3.06
+ 0.13 mm en el grupo de ratones hembras tratados y controles
respectivamente, con diferencia entre ambos grupos de 0.12 mn la
cual no fue estadísticamente significativa ("t" de Student:
1.660, P>0.05). El día 14 el promedio del diámetro
de la parte fue de 5.44 + 1.25 mn en el grupo de ratones hembras
control, con una diferencia entre ambos grupos de 1.85 mn,
estadísticamente significativa ("t" de Student: 5.844,
P<0.05). El día 22, el promedio del diámetro tumoral
fue 11.5 + 1.91 mn en el grupo de ratones hembras control fue
11.62 + 2.39 mn con una diferencia entre ambos grupos de 0.09 mn
la cual no fue estadísticamente significativa ("t" Student:
-0.127, P>0.05;)
Fig. 1. Acción del Piroxicam en
ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1.
Crecimiento tumoral diario in situ en milímetros, 17 ratones
hembras tratadas y 16 control. Valores absolutos
promedio
El peso promedio del tumor primario disecado fue 3.88 +
l.08g en el grupo de ratones hembras tratados y 2.5 + 0.61g en el
grupo de ratones hembras control con diferencia de 1. 38g la cual
fue estadísticamente significativa ("t" de Student:4.489,
P<0.05)
Fig. 2. Acción del Piroxicam en
ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1.
Tumor primario disecado. Peso en gramos. Ratones Hembras tratadas
y control. Valores absolutos.
El volumen del tumor primario disecado tuvo un promedio
de 3.53 + 1.29 ml y 2.31 + 0.73 ml en el grupo de ratones hembras
tratados y ratones hembras control respectivamente, con
diferencia entre ambos grupos de 1.22 ml la cual fue
estadísticamente significativa ("t" de Student: 3.3J2
P<0.05)
Fig. 3. Acción del Piroxicam en
ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1.
Tumor primario disecado. Volumen en milimetros. Ratones Hembras
tratadas y control. Valores absolutos.
El promedio del diámetro geométrico del tumor
primario disecado file 18.3± 0.76 mm en el grupo de ratones
hembras tratados y en el grupo de ratones hembras control fue de
16.75 ± 1.39 mm con una diferencia de 1.60 mm,
estadísticamente significativa ("t" de Student: 2.082,
P<0.05 Fig. 4).
Fig.4. Acción del Piroxicam en
ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1.
Tumor primario disecado. Diámetro geométrico en
milímetros. Ratones Hembras tratadas y control. Valores
absolutos.
Se observó un aumento de peso en ambos grupos lo
cual se explica por el desarrollo del Melanoma B16F 1 en la pata
de los animales, no obstante no se corresponde el aumento de peso
de los animales con el peso promedio del tumor primario disecado,
ya que el primero fue menor que el segundo; sin embargo, el
aumento de peso sólo fue significativo (P<0.05) en los
animales del grupo control, resulta-dos coinciden con los
reportados por Reddy et al, (1987), quienes observaron que el
Piroxicam administrado en la dieta no afectó el peso de
ratas machos con cáncer de colon
En cuanto a la presencia del tumor primario, observamos
que el Piroxicam inhibió el desarrollo del Melanoma B16F 1,
en contraste con los reportes de estudios en los cuales se ha
demostrado la acción inhibitoria del Piroxicam sobre la
formación de tumores en el intestino delgado y colon de
ratas, así como la disminución en la incidencia de
colonias neoplásicas y en el número de adenocarcinomas
en ratas sometidas a irradiación pélvica (Pollard et
aL, 1983 1987; Northway et aL, 1990).
Sobre el crecimiento del tumor primario "in situ" el
Piroxicam estimuló el crecimiento diario del tumor primario
el cual fue el mayor que en los animales del grupo control,
durante la segunda y tercera semana del experimento, aunque con
diferencia significativa (P<0.05) solo para el día
14
En cuanto a las dimensiones del tumor primario disecado
observamos que los promedios de peso, volumen y diámetro
geométrico fueron significativamente mayores (P<0.05) en
el grupo de ratones hembras tratados con Piroxicam.
Nuestra hipótesis de trabajo se basó en el
concepto de que los tejidos neoplásicos producen
niveles mayores de prostaglandinas (PG) que los tejidos normales,
esto ha sido demostrado tanto en humanos como en animales de
experimentación portadores de neoplasias (Goodwin et aL,
1980; Levine, 1981; Tilden y Balch, 1981: Laus et aL, 1987:
Valdéz y Perdigón, 1991). Existen evidencias que indican que las
PG, especialmente la PGE, está involucrada en la
iniciación, promoción y
progresión de procesos tumorales en forma directa por su
acción pro inflamatoria (Fischer, 1985; Trosko, 1985;
Fletcher, 1989; citados por Valdéz y Perdigón, 1991;
Goodwin et al, 1980) o indirectamente por afectar la respuesta
inmune, ya que a través del aumento de PG, los tumores se
hacen resistentes a las defensas inmunológicas del
huésped (Goodwin et aL, 1980; Tilden y Balch, 1981). Sin
embargo, el rol pro-cáncer de la PGE no es evidente en todos
los sistemas
experimentales.
Las PGE Inhiben la proliferación de linfocitos y el
crecimiento de células tumorales en algunos modelos
experimentales (Goodwin et al., 1980), de tal manera que en estos
modelos, la administración de
medicamentos inhibidores de la síntesis de PG estimulan el
crecimiento tumoral. Existen evidencias que las drogas que
inhiben la síntesis de PG pueden inhibir o estimular el
crecimiento tumoral, lo cual depende de la línea celular
sobre la cual actúen estas drogas y de la dosis
utilizada
Probablemente los resultados obtenidos en la presente
investigación se deben al posible efecto inhibidor de las PG
sobre la replicación celular del Melanoma B16F1, razón
por la cual el Piroxicam aumentó las dimensiones tumorales,
lo cual coincide con los resultados de trabajos realizados por
otros autores (Santore et aL, 1976; Favalli et aL, 1980) quienes
observaron que la proliferación celular del melanoma B 16
"in vitro e in vivo, aumentó significativamente con la
administración de
Indometacina e Hidrocortisona (drogas Inhibidoras de la
síntesis de PG). Mientras que la administración de una
análogo de la PGE Inhibió la replicación celular
de Melanoma B16 "in vitro in vivo" en ratones hembras C57BL/6
(Santoro et aL,1977).
1. El Piroxicam administrado a la dosis de 8 mg/kg de
peso no afectó significativamente (P<0.05)el peso de los
ratones hembras C57BL/6 con Melanoma B16F1.
2. El Piroxicam no Inhibió el desarrolló del
tumor primario (Melanoma B16F1).
3. El Piroxicam aumentó significativamente
(P<0.05) las dimensiones del tumor primario
disecado.
BARTKOWIAK D., SCHUMANN J., OTTO F., LIPPOLD A., DREPPER
H 1991. Flow Cytometry in the Prognosis of Primary Malignan
Melanoma. Oncology 48: 39-42.
CARTY T., ESKARA J., LOMBARDINO J., HOFFMAN W. 1980.
Piroxicam, a potent inhibitor of prostaglandin production in cell
culture. Structure Activity Study. Prostaglandins 19:
51-59.
FAVALLI C., GARACI E., ETHEREDGE E., SANTORO G., JAFFE
B. 1980. Influence of PGE on the Inmune Response in Melanoma
Bearing Mice. 3. Inmunology 125: 897-902.
FIDLER 3., NICOLSON O. 1976.Brief Co mmunication: Organ
Selectivity for implantation Survival and Growth of B16 Melanoma
Variant Tumor Lines. 3. National Cancer Institute
78:735-741.
GIOVANELLA B., FOGHH 3.1985. The Nude Mouse Med-ULA, Revista de la Facultad de
Medicina, Universidad de Los Andes. Vol. 3
Nº 3-4 1994. Mérida. Venezuela in Cancer Research.
Adv. Cancer Res 44:69-120.
GOODWIN J., HUSBY G., WILLIAMS R. 1980. Prostaglandin E.
and Cancer Growth. Cancer I mmunology and Inmunotherapy
897-902.
GUIMAN M., CNAAN A., INVAR. M, SHAFIR R, CHAILCHICK S,
ROZIN R., KLAUSNER J. 1985. Are Malignant Melanoma Patients at
Higher Risk for a Second Cancer? Cancer 68: 660665.
HART I., FIDLER I.1980. Role of Organ Selectivity in the
Determination of Metastasis Patterns of Bl6 Melanoma. Cáncer
Res. 40:2281 2287.
KATZ S. 1990. Enfoque del Tratamiento de los
Cánceres de la Piel. En: Kelly W. Medicina
Interna. Tomo 1. Editorial Médica Panamericana. 10p. 1379-
1383.
KIMURA A., XIANG 1986. High levels of Met-72 Antigen
Expression: Correlation with Metastasis Activity of Bl6 Melanoma
Tumor Cell Variants. 3. National Cancer Institute 76:
1247-1254.
LAU S., McMAHON J., McMENAMIN M., SCHUTLER H., BOYDM.
1987. Metabolism of Arachidonic Acid in Human Lung Cancer Cell
Lines. Cáncer Res. 47: 3757-3762.
LEVINE L., 1981. Arachidonic Acid Transformation And
Tumor Production. Adv. Cancer Res. 35:49-79.
LITTER M., 1988. Quimioterapia del Cáncer.
Farmacología Experimental y Clínica. 7ma. Edición. Editorial El
Ateneo. Buenos Aires.
1740-1761.
LONGO D. 1990. Principios del Tratamiento del
Cáncer. En: Kelly W. Medicina Interna. Edit Médica
Panam. pp. 1308.
MARCOWITZ J., CUSIMIL., CAREY R., KANG S., PAUYK C.,
SUBER A., COSIMI B. 1991. Prognosis After Initial Recurrence of
Cutaneous Melanoma. Arch. Surgery 126: 703-708.
NIGRO N., BULL A, BOYO M. 1986. Inhibition of Intestinal
Carcinogenesis in Rats: Effect of Difluoromethy lornithine with
Piroxicam on Fish oil. J. National Cancer Institute 77:
1309-1313.
NORTHWAY M., SCOBEY M., CASSIDY T., GEISNGER K. 1990.
Piroxicam Decreases Post irradiation Colonic Neoplasia in the Rat
Cancer 766: 2300-2305.
POLLARD M., LUCKERT P., SCHMIDT M. 1983. The suppressive
effect of Piroxicam on Autochthonous Intestinal Tumor in the Rat.
Cancer Letters 21: 57-61. PROCTOR J., AUCLAIR B., STOKOWSKI L.
1976. Brief Co mmunication: Encrine Factors and the Growth and
Spread of B16 Melanoma. J. National Cancer Institute 57:
1197-1198.
REDDY B., MASUYAMA II., KELLOFG. 1987. Dose related
Inhibition of Colon Carcinogenesis by Dietary Piroxicam a No
steroidal Anti-infla mmatory Drug during Differente Stages of Rat
colon Tumor Development. Adv. Cáncer Res. 47:
5340-5346.
RIEBER M., RIEBER M. 1993. Specific Tyrosinases
Associated with Melanoma Replicative Senescence and
Melanogenesis. Adv. Cancer Res. 53: 2469-2471.
SANTORO FG., PHILPOTT G., JAFFE B. 1977. Inhibition of
Bl6 Melanoma Growth in vivo by Synthetic Analogo of
Prostaglandina E2. Adv. Cáncer Res. 37:
3774-3779.
SCHIRRMACHER V. 1985. Cancer Metastasis: Experimental
Approaches. Theoretical Concepts and Impacts of Treatment
Strategies. Adv. Cancer Res. 43: 1-17.
STACKPOLEC., VALLE E., ALTERMAN A. 1991. Bl6 Melanoma
Metastasis to an "Artificial Organ" implant Adv. Cancer Res. 51:
2444-2450.
STERN, R., 1988. Epidemiología de las Enfermedades
cutáneas. En: Fitzpatrick T., Eisen A., Wolff K., Freedberg
J., Austen F. Dermatología En: Medicina General. 3era.
Edición. Vol. Editorial Médica Panamericana. Buenos
Aires. pp. 6-9.
TILDEN A., BALCH C. 1981. Indomethacin Enhancement of
Inmunocompetence in Melanoma patients. Surgery 90:
78-84.
URBINA DE VELANDIA E. 1980. Influencia de la
Indometacina sobre el Carcinoma Pulmonar de Lewis (3LL) en
ratones de la Cepa C5713L/6. 47p. Trabajo de ascenso (Profesor Agregado).
Universidad de Los Andes. Facultad de Medicina. Escuela de Medicina.
Mérida.
VALDEZ J., PERDIGONO. 1991. Piroxicam, Indomethacin and
Aspirin Action on a Murine Fibrosarcoma Effects on Tumor
Associated and Peritoneal Macrophages. Clinical and Experimental
Inmunology 86: 315-321.
Belkis Quiñones (1)
En Med-ULA, Revista de la Facultad de Medicina,
Universidad de Los Andes. Vol. 3 Nº 3-4 1994. Mérida.
Venezuela
Eloísa Urbina de Velandia (1). Mima Pérez Feo
(2)
(1) Departamento de Farmacología y
Toxicología. (2) Unidad de Psiquiatría. Facultad de
Medicina. Universidad de Los Andes. Mérida.
Venezuela.