Manual de química sanguínea veterinaria

INTRODUCCION

En los últimos años ha aumentado
considerablemente el interés de
la aplicación de los análisis clínicos veterinarios en el
diagnostico de patologías en animales. El
área de Química
sanguínea tiene gran importancia en esta aplicación
porque ofrece información adicional al veterinario para
realizar un diagnóstico más preciso que
conducirá al tratamiento específico, es decir, al
tratamiento de la causa determinante de la enfermedad, en lugar
de un tratamiento exclusivamente de los síntomas de
ésta.

Actualmente existe un gran número de
pruebas
Bioquímicas especialmente útiles en los estudios
clínicos, y es claro que el mayor crecimiento y el mayor
reto en patología clínica serán del
área de la química. Por ejemplo
cada año aumenta el número de enzimas
mensurables que sabemos se alteran en las enfermedades y cuyos cambios
pueden ser aplicados en el diagnóstico. En la miopatía
nutricional de los bovinos y ovejas, el único criterio
fiel que indica la presencia y extensión de la enfermedad
es el nivel elevado de la transaminasa glutámica
oxalacetica. Los valores
fuera de lo normal de otras enzimas
séricas también son de valor en el
diagnóstico y determinación de la
cuantía del daño en el hígado,
páncreas, huesos y otros
órganos y sistemas.

El sodio y el potasio séricos, junto con
alteraciones del equilibrio
acido-base pueden ser determinados con precisión y rapidez
suficiente para influir en el tratamiento de un paciente. La
pericia técnica y los instrumentos necesarios para algunas
de estas determinaciones están aumentando en complejidad y
por esta razón algunos valiosos medios de
diagnóstico tardan en alcanzar uso
práctico.

El presente manual pretende
ofrecer al Bacteriólogo una guía de técnicas
y procedimientos de
Química
sanguínea que se realizan en el Laboratorio
Clínico Veterinario para lograr así resultados
más óptimos y confiables.

Para lo anterior se plantean una serie de pasos a
seguir desde la toma de la muestra, pasando
por las determinaciones químicas hasta la obtención
de los resultados.

TABLA DE
CONTENIDO

1. TOMA DE MUESTRA

1.1. MATERIALES

1.2. PREPARACION DEL SITIO DE
PUNCION

1.3. PUNCION Y SITIOS DE PUNCION

2. TRANSPORTE DE
LA MUESTRA

3. MANEJO DE LA MUESTRA

3.1. PLASMA

3.2. SUERO

3.3. CONSERVACION DE LA MUESTRA

4. EQUIPO "AMES QUIK LAB"

4.1. CARACTERISTICAS DEL EQUIPO "AMES QUIK
LAB"

4.2. OPERACIONES DE
ENCENDIDO

5. DETERMINACIONES BIOQUIMICAS

5.1. GLUCOSA

5.2. COLESTEROL TOTAL

5.3. UREA

5.4. CREATINININA

5.5. ACIDO URICO

5.6. PROTEINAS TOTALES

5.7. ALBUMINA

5.8. TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA
(GPT)

5.9. TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA
(GOT)

5.10. FOSFATASA ALCALINA (ALP)

5.11. BILIRRUBINA TOTAL Y
DIRECTA

6. VALORES DE
REFERENCIA

1. 1. Tijeras, bisturí, algodón,
      gasa, solución yodada, alcohol, agujas, jeringas, vacutainer,
      tubos secos, tubos con anticoagulante (EDTA), bolsas para
      descartar material contaminado.

   2. MATERIALES
   3. PREPARACION DEL SITIO DE
      PUNCIÓN
2. TOMA DE MUESTRA

La posición adecuada y sujeción
efectiva del animal son esenciales para un muestreo con
éxito. Un poco de tiempo empleado
haciendo amigos, ganando la confianza del animal, son
generalmente bien recompensados. La práctica apacible y
suave deberá minimizar la necesidad de manejo
físico humano. No solo deben ser minimizados los
trastornos físicos y psíquicos sobre bases
humanitarias, sino también porque la sangre tomada de
un animal asustado, adrenalizado, puede originar resultados
equivocados en varios análisis, por ejemplo, la glucosa y los
ácidos grasos no esterificados.

El sitio de punción debe estar limpio y
libre de patógenos, esto incluye recortar el pelo, lavarlo
con jabón, detergente o solución yodada en dos
veces y después realizar una limpieza con alcohol. El
corte de pelo puede ser indeseable en animales de
exhibición por lo que es necesario pedir el consentimiento
del dueño, en caso que el corte no sea posible por
algún motivo la limpieza debe ser más estricta. La
asepsia debe realizarse en sentido contrario al crecimiento del
pelo del animal y en forma circular del centro hacia la
periferia. Después de la punción el sitio debe
dejarse seco, limpio y libre de sangre ya que
cualquier humedad o materia
orgánica favorece las infecciones.

1.3. PUNCION Y SITIOS DE PUNCION

La sangre venosa es
la muestra
más común obtenida de los animales. Las
técnicas varían de una especie a otra, según
la localización de los vasos sanguíneos
convenientes y el espesor, dureza y capa de la piel.

BOVINOS

La sangre es
obtenida de las venas yugular, mamaria (abdominal
subcutánea) y caudales y de las arterias carótida,
caudal y braquiales.

La vena yugular puede ser destacada presionando
con los dedos el canal yugular o usando un cordón. El vaso
prominente se ve bien en la mayoría de las vacas lecheras
y se palpa fácilmente en los animales obesos.
Tiene aproximadamente 2 cm de diámetro. Se introduce en la
vena una aguja larga calibre 14 y de 5 cm de longitud, o calibre
16 y 10 cm de longitud.

La acertada penetración en el vaso se
evidencia al brotar la sangre. otra
opción es introducir una aguja más fina (cal.18 de
38 mm.) en ángulo de 45° con la piel a lo
largo de la vena. Este procedimiento es
más fácil con la aguja insertada en una
jeringa.

Luego de haberse introducido la aguja se hace un
poco de succión con la jeringa, si ésta entro en el
vaso la sangre aparecerá en la jeringa. Puede ocurrir que
la aguja atraviese la vena y que la punta quede fuera del vaso,
entonces, retirando la aguja lentamente se llevará la
punta dentro de la luz de
éste. Extraída la sangre, se quita la
presión sobre la vena y se aplica presión manual sobre la
punción antes de sacar la aguja y por 30 a 60 seg
después para parar el sangrado.

La vena mamaria se punciona en forma semejante,
cuidando el operador de ser pateado. También es más
difícil de limpiar la piel, pero es
innecesario destacar la vena en la mayoría de los
casos.

La vena caudal se encuentra muy cerca de la
arteria, para realizar la punción se alza la cola y se
clava una aguja pequeña calibre 20 ó 22 de 25mm y a
15 cm de la base de la cola verticalmente en la línea
media hasta que penetre en el bazo. Se debe identificar la sangre
como venosa o arterial; ésta es más roja y sale con
mayor presión.

OVEJAS

La vena yugular es la más usada pero la
vena y arterias femorales son también fáciles de
puncionar. Se hace una partición en la lana, a veces
previamente cortada, para exponer un área de piel limpia.
La yugular se encuentra con frecuencia debajo de la piel pero
puede estar incluida en el tejido adiposo. La piel es blanda y la
aguja (calibre 18-22 de 25 mm) entra con facilidad y
frecuentemente atraviesa el vaso. Haciendo un poco de
succión, la sangre penetrará en la jeringa si la
aguja se encuentra en la luz del
vaso.

CABALLO

Para sangre venosa se utiliza la vena yugular. Con
el pulgar izquierdo en el surco yugular a la mitad de su trayecto
en el cuello, se comprime y sujeta la vena. Se clava la aguja
(cal. 18-20 de 38 mm de longitud) en ángulo aproximado de
15° con la piel 1 cm arriba del pulgar que está
sujetando el vaso, se introduce 1 ó 2 cm bajo la piel, se
aumenta el ángulo a 45° y se empuja para que entre en
la vena. Esta penetración debe hacerse en un solo movimiento
suave y continuo. Esto ayuda a disminuir el sangrado al sacar la
aguja. De la carótida puede obtenerse sangre arterial poco
más o menos como en la vaca, pero el procedimiento
requiere práctica y no debe ser intentado en un animal
valioso por una persona
inexperta. Es más fácil obtener sangre de la gran
arteria metatarsiana, situada en una canaladura sobre la cara
antero-externa del corvejón, entre el tercero y cuarto
huesos
metatarsianos. Se inyecta en la piel un poco de anestésico
local, después de unos minutos, se pincha la arteria con
una aguja de calibre 20 y 25 mm, mantenida en ángulo recto
con el vaso, firmemente encajado en el surco
óseo.

CERDO

Se usan las venas de las orejas y la cola y la
vena cava anterior. De una oreja se toma sangre por
incisión de una vena con escalpelo o por punción
con una aguja. La punción de la vena cava es peligrosa y
deber ser practicada por una persona
experta.

PERRO Y GATO

Es muy útil el servicio de un
ayudante experto en el manejo de animales. Las
venas cefálica y safena son usadas comúnmente en el
perro y algunas veces en el gato. Con una mano el ayudante sujeta
con suavidad la cabeza del animal y con la otra rodea por
detrás, arriba del codo extendiéndolo un poco. Con
el pulgar y los otros dedos de esta mano se fija la piel floja
para sujetar el vaso firmemente. El operador inmoviliza el vaso
con el pulgar e inserta la aguja (cal, 18, 22,25 o 38 mm) arriba
de este punto.

De la vena yugular se toma comúnmente
sangre en el gato y algunas veces en el perro; el procedimiento es
semejante al descrito para otras especies. La sangre arterial se
obtiene de la vena femoral, que es palpada en su fosa. Este
procedimiento
es probablemente más largo y doloroso que la
venipunción y se recomienda el uso de anestesia
local.

NOTA: La cantidad de muestra obtenida
a través de la punción debe tenerse en cuenta en
las diferentes especies, es así como para las especies
mayores puede obtenerse por punción sin causar trastornos
hasta 15 ml de sangre, y en pequeñas especies la muestra no se
puede exceder de 10 ml.

AVES

Igualmente que para las otras especies la
sujeción o inmovilización es de gran importancia
para el éxito del procedimiento.
Existen varios sitios de punción que serán elegidos
de acuerdo a la experiencia del operador.

La vena radial (alar), es el sitio de
punción mas comúnmente elegido por su facilidad; se
elige una de las dos alas, se levanta, se sujeta el ala libre
junto con las patas del animal, seguidamente quien realizara la
punción inmoviliza con los dedos pulgar e índice la
vena alar, previo a esto se debe desplumar el recorrido de la
vena con el fin de visualizarla mejor, con aguja numero 21 se
hace inserción sobre la vena en un ángulo de
15°, se debe tener cuidado de no extravasar ya que la pared
de la vena es muy delgada y podría ocurrir con facilidad,
observándose hematoma inmediatamente, si esto no sucede se
procede a extraer la muestra,
aproximadamente de 1 a 2 ml de sangre en aves de mayor
tamaño, y en aves mas
pequeñas 0,5 ml ya que una cantidad mayor puede producir
anemias en esta especie. Otros sitios de punción menos
utilizados son la vena atlantooccipital ubicada entre el atlas y
la región occipital, la inserción de la aguja debe
hacerse perpendicular al sitio antes mencionado. La
punción intracardiaca debe realizarse con mucho cuidado ya
que un error en ella, al puncionar las aurículas puede
causar la muerta inmediata del animal.

2. TRANSPORTE DE
LA MUESTRA

El cuidado de la muestra sanguínea hasta
que es analizada en el laboratorio es
importante, debe ser correctamente rotulada y conservada para las
pruebas
bioquímicas.

Para el transporte y
conservación del suero se debe esperar la
retracción del coágulo, en nuestro medio, la sangre
de los animales se coagula entre 20-30 minutos, sin embargo lo
mas recomendado es esperar 1-2 horas a temperatura
ambiente,
cuanto más tiempo se deje
para que esta retracción tenga lugar, mayor cantidad de
suero se obtendrá, aunque la cantidad de suero no
será nunca mayor de un 40% del volumen original
de sangre. La retracción y coagulación se pueden
producir mucho más rápido si se incuba el frasco a
37°C durante 1 hora y después se coloca en un
frigorífico durante media hora más; después
de la retracción del coágulo la muestra debe ser
refrigerada a 4°C para su transporte,
colocándola en hielo picado o en una caja
fría.

Para el transporte y
conservación del plasma no hay necesidad de esperar
que la sangre se sedimente, después de obtenida debe ser
refrigerada para su envío al laboratorio en
nevera portátil con hielo seco o picado.

El suero y el plasma no deben ser
conservados más de 6 horas en refrigeración sin ser separados de los
demás componentes sanguíneos, porque esto trae como
consecuencia alteración en los diferentes metabolitos de
la sangre a determinar y por lo tanto errores en los resultados
del laboratorio.

Para la conservación de la muestra se
emplean anticoagulantes apropiados para algunas determinaciones,
como por ejemplo: se utiliza fluoruro para la glucosa o heparina
para la insulina, etc. Debemos tener conocimiento
de la aplicación de estos anticoagulantes en nuestro medio
para mejorar en lo posible el transporte y conservación de
las muestras a nuestro laboratorio y
evitar errores en las determinaciones.

La transferencia de muestras de una persona a otra o
de un lugar a otro no debe hacerse descuidadamente, la
obtención, transporte y análisis de una muestra de sangre siempre
debe registrarse en forma oficial. El incumplimiento de los
procedimientos
formales de registro
descalifica la muestra para todo tratamiento
ulterior.

3. MANEJO DE LA MUESTRA

En el laboratorio dependiendo de la muestra (suero
o plasma) se procede de la siguiente manera:

3.1. PLASMA

El tubo que contiene sangre más
anticoagulante se debe centrifugar a 1500 – 2000 r.p.m. durante
10-15 minutos para separar las células
del plasma. El plasma que constituye la capa más externa,
se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un
cuenta gotas, y se transfiere a un tubo de almacenamiento.
Se debe tener mucho cuidado para no alterar la capa celular, por
lo que la pipeta no se debe poner demasiado cerca de la capa de
células
ya que la succión puede alterar y extraer cierto numero de
células
de la superficie que podrían alterar las determinaciones
bioquímicas. Para esto se recomienda centrifugar
nuevamente este sobrenadante y repetir el paso anterior,
obteniendo el plasma con menos células
interferentes.

3.2. SUERO

El tubo que contiene sangre sin anticoagulante se
debe centrifugar a 1500 r.p.m. durante 10 minutos para separar
las células
del suero. Luego con una pipeta Pasteur se debe separar el suero
o sobrenadante y transferir a un tubo de almacenamiento
para la realización de las diferentes pruebas.

La separación del suero del coágulo
es generalmente mucho mas sencilla, cuando se emplean recipientes
de vidrio, o de
poliestireno especialmente tratados, puesto
que el coagulo se retrae con suavidad de las paredes del frasco o
del tubo y eventualmente queda como una pequeña
protuberancia en la base, entonces el suero se puede verter o
aspirar fácilmente con pipeta y transferir a un tubo para
almacenamiento.
También se recomienda como en el caso del plasma,
centrifugar nuevamente el suero y obtenerlo libre de
células que pueden interferir en las
determinaciones.

3.3. CONSERVACION DE LA MUESTRA

Las muestras de suero o plasma previamente
separadas de las células, pueden conservarse a temperatura
ambiente
(20-30°C) durante un día sin que se deterioren, en la
parte refrigerada de un frigorífico (4°C) durante 4
días; en el congelador (-15 a -20°C) durante una
semana o indefinidamente. Particularmente, debe evitarse hacer
congelaciones y descongelaciones repetidas para que las enzimas no
pierdan su actividad inicial. Las muestras congeladas deben
descongelarse lentamente hasta la temperatura
ambiente, y
entonces las muestras descongeladas se deben mezclar
completamente por inversión. De esta manera se conservaran
mejor los metabolitos, se obtendrán resultados mas
acertados y diagnósticos más
exactos.

4. EQUIPO "AMES QUIK LAB"

4.1. CARACTERISTICAS DEL EQUIPO "AMES QUIK
LAB."

El equipo AMES QUIK LAB trabaja con programas
específicos de métodos
prefijados, estos programas manejan
parámetros como la longitud de onda, factor
estándar, valores de
referencia, etc, que están almacenados en el módulo
QUIK LAB.

En el trabajo de
rutina se pueden seleccionar estos programas
oprimiendo simplemente la tecla de la determinación
deseada y automáticamente el instrumento selecciona los
parámetros necesarios para la
determinación.

Las condiciones ambientales de trabajo tienen una
temperatura de
15-35°C y una humedad relativa de 15-85 %, además
maneja dos tipos de temperatura,
la temperatura de medida (25°, 30° y37°C) y una
temperatura de referencia (25°, 30° y37°C), las
cuales deben ser iguales en el momento del análisis.

El tiempo de medida
utilizado es de 45, 90 y 180 seg según cada
determinación. En cuanto a la longitud de onda posee
filtros interferenciales de precisión colocados en un
rotor con posiciones de 440, 405, 500, 546, 578 y 620 nanometros
aproximadamente.

El volumen de la
cubeta va de 500 m L a 2100 m L para técnicas micro y
semimicro.

4.2. OPERACIONES DE
ENCENDIDO

1. Encender el equipo del interruptor POWER que se
   encuentra en la parte trasera del equipo.
2. Esperar 3 minutos la señal auditiva del
   equipo para iniciar procedimiento.
3. Elegir la temperatura necesaria según
   cada determinación. Así:

1. Oprimir la tecla "PROGRAM"
2. Oprimir la tecla "3"
3. Mediante la tecla "*" elegir la temperatura
   deseada según la técnica.
4. Oprimir la tecla "ENTER".
5. Oprimir la tecla "8".
6. Mediante la tecla "*" elegir la temperatura
   interna del equipo, la cual debe ser igual a la temperatura de
   la técnica.
7. Oprimir la tecla "ENTER" dos
   veces.

4. Oprimir la tecla correspondiente a la
determinación a realizar.

EN ESTE MOMENTO EL EQUIPO ESTARA EN OPTIMAS
CONDICIONES PARA INICIAR EL PROCEDIMIENTO DE CADA
PRUEBA.

5. DETERMINACIONES BIOQUIMICAS

Las determinaciones bioquímicas en nuestro
laboratorio se realizan utilizando suero como principal muestra,
se prefiere trabajar con suero porque este se hemoliza menos
probablemente que el plasma, además no contiene
anticoagulantes los cuales pueden interferir en las
determinaciones que se vayan hacer o pueden extraer el agua de las
células sanguíneas originando la dilución de
los constituyentes. Sin embargo, el plasma puede ser utilizado en
las determinaciones de urea y glucosa porque no existe una
diferencia muy marcada en la concentración de estos
metabolitos en los hematíes y en el plasma, pero la
diferencia en las concentraciones de otros constituyentes es mas
elevada. En nuestro laboratorio se realizan con mayor frecuencia
y con fines diagnósticos las siguientes
determinaciones:

5.1. GLUCOSA

El nivel de glucosa sanguínea refleja las
condiciones nutricionales, emocionales y endocrinas del sujeto.
Después de la comida aumenta "hiperglucemia alimentaria"
en animales monogastricos, pero no en los rumiantes. Durante la
excitación aumenta probablemente como efecto de la
liberación de norepinefrina. Por esta razón es
costumbre obtener la sangre de individuos posabsortivos quietos,
para determinar la "glucosa sanguínea en ayunas". La
concentración de glucosa en lo hematíes se aproxima
a la concentración de glucosa en plasma en la
mayoría de los monogastricos y rumiantes jóvenes.
Los eritrocitos de los equinos contienen también poca
glucosa, la concentración de glucosa en el plasma excede
generalmente a la de glucosa en sangre en 10 a 30 mg/ 100 ml en
rumiantes y caballos adultos.

La concentración de glucosa
sanguínea aumenta por la norepinefrina, epinefrina y
glucagón, tres substancias glucogenolíticas, y por
los glucocorticoides que inhiben la utilización de la
glucosa y estimulan la gluconeogénesis. También se
elevan los valores de
glucosa por diabetes mellitus asociada con
hiperadrenocorticalismo, debido a una hipersecreción de
las hormonas
adrenocorticales por neoplasia o superdosificación de
corticoesteroides, se asocia también con hipertiroidismo y
convulsiones.

La concentración de glucosa disminuye por
el ayuno o por el ejercicio prolongado, por el exceso de insulina
ya sea por un insulinoma o por dosis altas de insulina como
terapia; en toxemia, inanición y lesiones
hepáticas; también disminuye en
hipoadrenocorticalismo debido a una reducción en la
secreción de las glándulas adrenales o a una
producción reducida de ACTH por la
glándula pituitaria.

RESPONSABLE.

Bacteriólogo.

METODO.

GOD-POD. Test color –
enzimático. Glucosa – oxidasa –
peroxidasa.

PRINCIPIO.

La glucosa es transformada por la glucosa oxidasa
(GOD), en ácido glucónico y en peróxido de
hidrógeno, el cual en presencia de peroxidasa (POD), oxida
el cromógeno (4-aminofenazonal/fenol),
convirtiéndolo en un compuesto de color rojo, el
cual es cuantificado por el fotómetro del
equipo.

MUESTRA.

Suero o plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUICK LAB

REACTIVOS.

1 reactivo (tampón/enzimas/cromogeno)

1 A Fenol

La solución 1 es estable a 2-8°C
durante 2 meses y a 15 -25°C durante 2
semanas.

CONDICIONES.

El animal en lo posible debe estar en "ayunas".
(Mínimo 8 horas).

Evitar en lo posible la fuerza en el
momento de la toma de muestra, para minimizar las condiciones de
estres, que
pueden alterar el metabolismo de
los carbohidratos.

LINEALIDAD.

La linealidad del método se
obtiene hasta 500mg/dl.

PROCEDIMIENTO

Preparar fotómetro a una temperatura de
37°C.

Incubar a 37°C en baño de María
por 15 min, o a temperatura ambiente por
30 min.

Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES

• Calibración del equipo.(Remitirse al
  manual del
  equipo).
• Centrifugar muestras lo más
  rápido posible.
• Cambio de lote de sueros multicalibradores y
  reactivos, realizar nueva calibración del
  equipo.
• Verificar reactivos que correspondan a la
  prueba pedida y evitar agotamiento de los
  mismos.
• Rechazar muestras hemolizadas e
  insuficientes.
• Muestras que no se preparan el mismo
  día, refrigerar a 4ºC.
• Confirmar la linealidad de la prueba y si es
  necesario realizar las diluciones
  respectivas.

EXPRESION DE RESULTADOS.

Los resultados para esta prueba en nuestro
laboratorio, se expresan en mg/dl.

5.2. COLESTEROL TOTAL

El colesterol ha recibido gran atención en
medicina humana
porque se halla implicado en la ateroesclerosis, pero su
importancia en las enfermedades de los animales
domésticos no ha sido aun demostrada.

El colesterol se encuentra en todas las fracciones
lipídicas de la sangre. Para los fines de patología
clínica, el colesterol se valora en el plasma como
colesterol total y a veces se divide en dos fracciones: "libre" y
esterificado.

El colesterol "libre" esta unido a lípidos
pero no esterificado.

La mayoría de los animales pueden tener
niveles elevados de colesterol después de alimentarse con
grasa, también en disfunción hepática
incluyendo la obstrucción del conducto biliar, porque la
destrucción de las células hepáticas trae
como consecuencia una disminución en la actividad
metabólica del hígado y se reduce mas la
degradación del colesterol que la síntesis, por lo
que los niveles en sangre aumentan. En hipotiroidismo los niveles
de colesterol aumentan porque la carencia de hormonas
tiroideas reduce la actividad metabólica de las célula
hepáticas así como también de las
células de otras partes del organismo. También
aumentan los niveles de colesterol en diabetes mellitus ,
en nefrosis y puede presentarse un ligero incremento con infarto
al miocardio.

Los niveles bajos de colesterol pueden indicar
debilidad o malabsorción de grasa pero son de muy rara
incidencia.

La determinación de colesterol total por el
laboratorio es supremamente útil en el hipotiroidismo y en
la nefrosis, en la disfunción hepática y
diabetes mellitus se deben realizar otras pruebas mas
especificas.

RESPONSABLES.

Bacteriólogos.

METODO.

Test Enzimático
Colorimétrico.

PRINCIPIO DEL ANALISIS.

Los ésteres del colesterol son hidrolizados
por la colesterol éster hidrolasa a colesterol libre y
ácidos grasos. El colesterol libre existente, junto con el
producido por la reacción, es oxidado por la colesterol
oxidasa a colestenona y peróxido de hidrogeno.
Este ultimo en presencia de peroxidasa oxida el cromogeno (4
aminofenazona/ácido 2-hidroxifenilacetico) a un compuesto
de color
rojo.

MUESTRA.

Suero, plasma con EDTA.

EQUIPOS.

QUIK LAB

REACTIVOS.

1 TAMPON/ ACIDO 2-HIDROXIFENILACETICO/
TENSOACTIVOS

1 A TAMPON / ENZIMAS /4-
AMINOFENAZONA / FERROCIANURO POTASICO.

PATRON: Colesterol de 200mg/dl, listo para ser
utilizado.

La solución 1 es estable de 2-8 °C
durante un mes.

La solución de trabajo (1+2) es estable de
2 a 8 °C durante dos semanas si esta guardada en botella
oscura.

CONDICIONES.

Para un optimo resultado de laboratorio es
preferible que el animal tenga un ayuno mínimo de 12 horas
y que durante la toma de la muestra no se encuentre en
condiciones de estres, esto es
supremamente difícil en nuestro medio, pero si es posible
realizarlo, se obtendrán resultados mas
acertados.

LINEALIDAD

La linealidad del método es
de 900 mg/dl.

PROCEDIMIENTOS.

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C.

Incubar a 37°C en baño de María
por 5 min, o temperatura ambiente por
15 min.

Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones
correctivas de glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS

Los resultados para esta determinación se
expresan en mg/dl o en mmol/L. En el laboratorio se expresan los
resultados en mg/dl.

5.3. UREA

La urea es un compuesto orgánico
relativamente simple producido por los mamíferos en el
hígado como producto final
del catabolismo de las proteínas.
Es una de las substancias más difusibles en el cuerpo y se
encuentra en todos los líquidos del cuerpo. Es
relativamente atóxica, aunque en concentraciones altas
desnaturaliza proteínas
con la formación de productos
tóxicos.

La urea se elimina principalmente por los
riñones, pero una porción de ella por la piel,
sobre todo en los animales que sudan.

Se a observado que el nitrógeno ureico
sanguíneo no se eleva en perros, salvo
pocas excepciones, hasta que al menos el 75% del
riñón funcional se ha destruido, y se aconseja
hacer la determinación en todos los pacientes
quirúrgicos de mas de 5 años y en toda enfermedad
en perros viejos
antes de iniciar el tratamiento.

La urea se aumenta en sangre por trastornos
renales como la insuficiencia renal crónica y aguda; por
obstrucción de las vías urinarias; excesiva
destrucción de proteínas
como en estados de fiebre, toxicidad o sepsis extensa.
También se pueden aumentar los niveles de urea por una
hemoconcentración debida generalmente a graves
vómitos o
diarreas; cuando existe alteración de la función
cardiaca que reduce el flujo de sangre a través del
riñón se ve aumentada la concentración de
urea en sangre.

El descenso en los niveles de urea son raros,
teóricamente pueden presentarse en asociación con
graves enfermedades
hepáticas o malnutrición de proteínas.

RESPONSABLE.

Bacteriólogo.

METODO.

UV a tiempo
fijo.

PRINCIPIO.

La urea se hidroliza en presencia de ureasa, en amoniaco
y dióxido de carbono. El
amoniaco producido en esta reacción se combina con a
-cetoglutarato y NADH en presencia de dehidrogenasa de glutamato,
para producir glutamato y NAD. La cantidad consumida de NADH
determinado por la disminución de absorbancia en el ultra
violeta es proporcional a la cantidad de urea en la
muestra.

MUESTRA.

Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:50 con
agua
destilada.

EQUIPO.

QUIK LAB

REACTIVOS

1 ENZIMAS/ COENZIMA/ SUBSTRATO

1 A Tampón

PATRON: Urea 80mg/dl. Listo para su
uso.

La solución 1 se mantiene estable durante 4
semanas de 2- 8°C y durante una semana de
15-25°C.

CONDICIONES.

El animal debe tener un "ayuno" de 12 horas antes
de la toma de muestra.

Aunque la urea es estable en suero, plasma u orina
durante varios días bajo refrigeración, las muestras, especialmente
la orina, deberán valorarse a las pocas horas para evitar
la contaminación bacteriana, que
podrían provocar una perdida rápida de la
urea.

LINEALIDAD.

En suero y plasma la linealidad del método es
hasta 300mg/dl, y 150 g/l para la orina. Para concentraciones
altas, diluir la muestra 1:2 con agua
destilada, repetir la valoración y multiplicar el
resultado por 2.

PROCEDIMIENTO.

Preparar el fotómetro a una temperatura de
30°C.

Leer inmediatamente colocando muestra por
muestra.

Colocar la solución standar y presionar la
tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y presionar la tecla
"ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones
correctivas de glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS.

Los valores en el
laboratorio se expresan en mg/dl.

5.4. CREATININA

La creatinina esta en el cuerpo principalmente en
forma de fosfato de alta energía. En los músculos
es fuente de energía. En animales jóvenes de
crecimiento se encuentra en mayores cantidades. La creatinina es
una substancia muy difusible y distribuida de manera uniforme en
el agua
corporal. Se elimina del plasma aproximadamente en la tasa de
filtración glomerular.

Al estudiar la excreción de creatinina,
tiene valor el hecho
de que los niveles séricos de creatinina casi no son
afectados por la creatinina exógena de los alimentos, por la
edad, el sexo, el
ejercicio o la dieta. Por lo tanto los niveles elevados solamente
se presentan cuando se altera la función
renal.

La medición de los niveles de creatinina en
sangre proporcionan la misma información para el diagnostico y
pronostico de la función renal que la obtenida por la
medición del nitrógeno
uréico.

RESPONSABLES.

Bacteriólogos.

METODO.

Picrato alcalino con
desproteinización

PRINCIPIO.

La creatinina reacciona en un medio alcalino que
no contenga proteínas
con pricato, para formar un compuesto rojo –anaranjado
(Reacción de Jaffe).

MUESTRA.

Suero o plasma.

Orina: diluida: 1:50 con agua
destilada

EQUIPO.

QUIK LAB

REACTIVOS.

1 Picrato de sodio…………
44mmol/L

2 Hidróxido de sodio……. 4.0
N

PATRON: Creatinina 2 mg/dl. Listo para ser
utilizado.

Los reactivos 1 y 2 son estables a temperatura
ambiente de 15 a 25°C hasta la fecha de caducidad que viene
indicada en la etiqueta.

CONDICIONES.

No requiere ayuno previo, porque su
excreción depende muy levemente de la alimentación y la
diuresis.

No debe estar el animal sometido a estres intenso
que puede ser causado en el momento de la toma de muestra, por la
resistencia que
el animal ejerza.

LINEALIDAD.

El método es
lineal hasta 12 mg/dl de creatinina. Para concentraciones mayores
mezclar un volumen de la
muestra con un volumen igual de
agua
destilada, repetir el ensayo y
multiplicar el resultado por 2.

PROCEDIMIENTO.

Prepara el fotómetro a una temperatura de
30°C.

Leer inmediatamente colocando muestra por
muestra.

Colocar la solución standar y presionar la
tecla "CALIBRATE", luego colocar la muestra y presionar la tecla
"ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

• Calibración del equipo. (remitirse al
  manual del
  equipo)
• Utilizar adecuado volumen de
  muestra en las cubetas.
• Verificar reactivos.
• Centrifugar muestra lo más rápido
  posible.
• Rechazar muestras hemolizadas,
  hiperlipémicas e insuficientes.
• Refrigerar muestras que no se procesen el mismo
  día a 4ºC.
• Confirmar linealidad de la prueba y diluir si
  es necesario.
• Realizar periódicamente el mantenimiento del equipo.

EXPRESION DE RESULTADOS

Los resultados dependiendo del tipo de muestra se
expresan así:

SUERO: Se expresa en mg/dl o m mol/L.

ORINA: Se expresa en mg/Kg de peso en 24
horas.

5.5. ÁCIDO URICO

Este compuesto es el producto final
del catabolismo de las purinas y pirimidinas en mamíferos
y el producto final
del catabolismo de las proteínas en aves y
reptiles.

No se conoce muy bien la significación de
la elevación o disminución del ácido
úrico en la sangre de los mamíferos. Como el
ácido úrico se convierte en alantoina en el
hígado en todas las especies, excepto en el hombre, los
primates inferiores y el perro dálmata, se ha sugerido que
su medición es una prueba sensible de función
hepática.

RESPONSABLES.

Bacteriólogos.

METODO.

Test- color
enzimático.

PRINCIPIO

El ácido úrico es convertido por la
uricasa en alantoina y peróxido de hidrógeno, el
cual en presencia de peroxidasa oxida el cromógeno (4
aminofenazona/ácido 3.5 –dicloro – 2
hidroxibencenosulfonico) formando un compuesto
rojo.

MUESTRA

Suero, plasma con EDTA y orina diluida 1:10 con
NaOH 0,01 N

EQUIPO

QUIK LAB

REACTIVOS

1 Tampón/enzimas /4 –aminofenazona /
3-hidroxi-2,4,6 ácido triiodobenzoico/ potasio
ferrocianuro

1 A Surfactante

PATRON: ácido úrico 6 mg/dl. Listo
para su uso.

La solución 1 es estable 4 semanas de 2 –
8°C o una semana de 15 a 25°C, siempre que se mantenga en
su botella original.

CONDICIONES

El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas. Evitar
el estres en la toma
de la muestra porque aumentan las concentraciones de ácido
úrico.

LINEALIDAD

La linealidad del método es
hasta 30 mg/dl.

PROCEDIMIENTO

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C

Incubar a 37°C en baño de María
por 5 min, o temperatura ambiente por 10 min.

Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones
correctivas de glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS.

Los resultados para esta prueba en nuestro
laboratorio, se expresan en mg/dl.

5.6. PROTEINAS TOTALES

Los principales contribuyentes a la presión
osmótica del plasma sanguíneo son los iones y en
una pequeña proporción las proteínas. Sin
embargo, la baja constante de presión osmótica de
las proteínas es vital para el mantenimiento
del sistema
cardiovascular. Se distinguen dos grandes grupos de
proteínas del plasma: las albúminas y las
globulinas. Se separan unas de otras por medios
químicos sencillos y determinando la cantidad de cada
grupo se
obtiene la relación A-G.

La albúmina de la sangre y las globulinas
con excepción de algunas globulinas gamma, son
sintetizadas en el hígado. Por lo tanto cualquier proceso que
afecte la síntesis de albúmina disminuirá la
relación A-G.

La producción de anticuerpos puede ocasionar
algunos cambios en la concentración de gamma-globulina;
sin embargo el cambio es
más cualitativo que cuantitativo.

El incremento en las proteínas totales
puede deberse a la deshidratación la cual presenta una
hemoconcentración por vómitos o
diarreas, también por un aumento en el nivel de globulina
cuando no existe deshidratación, como en enfermedades
hepáticas avanzadas (cirrosis), infecciones
crónicas y en algunos casos de
neoplasias.

Una disminución en los niveles de las
proteínas totales se debe siempre a un nivel bajo de la
albúmina, acompañado ya sin incremento del nivel de
globulina, o por un incremento en el nivel de globulina que es
menor que el descenso en el nivel de albúmina. Por lo
tanto la relación A-G disminuye. Esto puede ocurrir por:
Perdida de albúmina en orina por nefrosis, perdidas de
proteínas plasmáticas por hemorragias, falta de
ingestión de cantidades adecuadas de proteínas en
la dieta, incapacidad del hígado para producir
albúmina por hepatitis o
cirrosis hepática.

Un bajo nivel de proteínas en la sangre
origina una reducción en la presión osmótica
coloidal del plasma que puede producir edema.

RESPONSABLE.

Bacteriólogos.

METODO.

Método al biuret.

PRINCIPIO.

En solución alcalina, las proteínas
forman con los iones de cobre un
complejo coloreado.

MUESTRA.

Suero, plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUIK LAB.

REACTIVOS.

1 Reactivo biuret.

1A agente tensioactivo.

PATRON : Albúmina bovina,
fracción V, 6 gr/dl. Listo para ser
utilizado.

La solución 1 es estable durante 6 meses de
15 a 25°C si se almacena en una botella de
plástico.

CONDICIONES.

El animal requiere un "ayuno" mínimo de 8
hora, antes y durante la toma de la muestra deben evitarse
situaciones de estress.

LINEALIDAD.

El método es lineal hasta aproximadamente
12 g /dl de proteína total.

PROCEDIMIENTO.

Preparar el fotómetro a una temperatura de
20 a 25°C.

Incubar a temperatura ambiente por 20 min. Leer
entre 20 y 60 min.

Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estándar y
presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

ACCIONES CORECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones
correctivas de Glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS.

En el laboratorio los resultados se expresan en g
/dl.

5.7. ALBUMINA

La albúmina sanguínea es sintetizada
en el hígado, y su disminución afecta la
relación A-G, como ocurre en la fibrosis del
hígado.

Se observa hipoalbuminemia en la
glomerulonefritis, amiloidosis, ocasionalmente en nefritis
intersticial canina, desnutrición, diarrea parasitaria,
malignidades hepáticas, necrosis hepática y
hepatitis.

No se sabe mucho acerca de casos de
hiperalbuminemia. En la deshidratación, la cantidad
absoluta de albúmina puede aumentar, sin embargo las
globulinas también aumentan de modo que no varia la
relación A-G.

Otras causas de disminución de la
albúmina puede ser la falta de aminoácidos
adecuados, en la gastroenteritis la rapidez del movimiento y
posiblemente la mala digestión contribuyen a una perdida
mayor.

RESPONSABLE

Bacteriólogos

METODO

BCG

PRINCIPIO

La albúmina en una solución
tamponada reacciona con el Verde de Bromocresol (BCG), a
través de una reacción de enlace con el
colorante.

MUESTRA

Suero o plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUIK LAB.

REACTIVOS

Reactivo BCG

Patrón : Albúmina bovina
fracción V, 5 gr/dl. Listo para su uso.

CONDICIONES.

El animal requiere un "ayuno" mínimo de 8
hora, antes y durante la toma de la muestra deben evitarse
situaciones de estress.

LINEALIDAD.

El método es lineal hasta aproximadamente
6g /dl de albúmina.

PROCEDIMIENTO.

Preparar el fotómetro a una temperatura de
25°C.

Incubar a temperatura ambiente por 1 min. Leer en
10 min.

Colocar el Blanco en la cubeta de reacción
y presionar la tecla "BLANK", luego colocar el estandar y
presionar la tecla "CALIBRATE", por último colocar la
muestra y presionar la tecla "ANALYSE".

ACCIONES CORECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones
correctivas de Glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS.

En el laboratorio los resultados se expresan en g
/dl.

5.8. TRANSAMINASA GLUTAMICA PIRUVICA (GPT- ALT
)

Esta enzima cataliza la transferencia de un grupo a –
amino de la alanina al ácido a -cetoglutarico. La enzima
se encuentra en el hialoplasma de todas las células y
existe una relación lineal entre la GPT hepática y
el peso del animal. Siendo este el caso la determinación
de GPT es casi especifica del hígado del perro y el gato,
mientras que es de escaso o de ningún valor en las
enfermedades de
bovinos y equinos. Se ha encontrada muy elevada en la necrosis
hepática.

Es una enzima muy estable, y en estado de
congelación se conserva largo tiempo. La
ictericia no estorba la determinación de la enzima, pero
debe evitarse la hemólisis.

Las enfermedades hepáticas que producen
niveles elevados de GPT comprenden neoplasias malignas, cirrosis
y hepatitis,
incluyendo la que se produce en el perro por el virus de la
hepatitis
canina infecciosa (HCI)

RESPONSABLES.

Bacteriólogo.

METODO.

Test cinético UV

PRINCIPIO.

a – cetoglutanato +L- alanina en presencia de GPT
produce L –glutamato + piruvato, este a su vez +NADH +H+ en
presencia de LDH produce lactato +NAD.

MUESTRA.

Suero, plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUIK LAB

REACTIVOS.

1 Reactivo Tampón /
substrato.

1 A NADH/LDH

2 a – cetoglutarato

PIRIDOXAL 5-FOSFATO

La solución 1 es estable de 2-8°C
durante 3 meses y de 15-25°C durante 1
semana.

La solución 2 es estable de 2-8°C
durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

CONDICIONES.

El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas como
mínimo.

LINEALIDAD.

Para concentraciones mayores de 265 y 271 U/L a
una absorbancia de 340 y 334 nm respectivamente, realizar una
dilución 1:10.

PROCEDIMIENTO

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C.

Colocar a temperatura ambiente durante 30
segundos.

Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
cubeta de reacción y presionar al tecla
"START".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

• Calibración del equipo.(Remitirse al
  manual del
  equipo).
• Centrifugar muestras lo más
  rápido posible.
• Cambio de lote de sueros multicalibradores y
  reactivos, realizar nueva calibración del
  equipo.
• Verificar reactivos que correspondan a la
  prueba pedida y evitar agotamiento de los
  mismos.
• Rechazar muestras hemolizadas e
  insuficientes.
• Muestras que no se preparan el mismo
  día, refrigerar a 4ºC.
• Confirmar la linealidad de la prueba y si es
  necesario realizar las diluciones
  respectivas.
• Asegurar el mantenimiento del equipo.

EXPRESION DE RESULTADOS

Los resultados para esta prueba se expresan en
U/L.

5.9. TRANSAMINASA GLUTAMICA OXALACETICA (GOT –
AST)

Esta enzima hialoplasmica se encuentra en la
mayoría de las células del cuerpo; la mayor
concentración esta en las fibras musculares. De ahí
su elevación en la necrosis muscular.

La GOT cataliza la transferencia de un grupo a -amino
del ácido aspartico al ácido a -cetoglutarico. Su
valoración es muy útil en animales grandes como
indicación de lesión muscular o necrosis
hepática. La enzima se eleva considerablemente en
miopatías por ejercicio en caballos, distrofia muscular
aviar, en caballos durante el entrenamiento y
en la enfermedad de los músculos blandos.

RESPONSABLES.

Bacteriólogos

METODO

Test cinético UV

PRINCIPIO

L –aspartaco + acetoglutarato en presencia
de GOT (reacción reversible) produce L –glutamato +
oxaloacetato , este ultimo con la adición de NADH mas H+
en presencia de MDH produce L – malato
+NAD.

MUESTRA

Suero, plasma con EDTA.

EQUIPO

QUIK LAB

REACTIVOS

1 Reactivo: Tampón /
substrato

1 A NADH/MDH/LDH

2 a – cetoglutarato

PIRIDOXAL 5 FOSFATO

La solución 1 es estable de 2-8°C
durante 3 meses y de 15-25°C durante 1
semana.

La solución 2 es estable de 2-8°C
durante 4 meses y de 15-25°C durante 1 mes.

CONDICIONES

"Ayuno" de 8 horas
aproximadamente.

LINEALIDAD.

Para concentraciones mayores de 265 y 271 U/L a
una absorbancia de 340 y 334 nm respectivamente, realizar una
dilución 1:10.

PROCEDIMIENTO

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C.

Colocar a temperatura ambiente durante 30
segundos.

Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
cubeta de reacción y presionar la tecla
"START".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

• Calibración del equipo.(Remitirse al
  manual del equipo).
• Centrifugar muestras lo más
  rápido posible.
• Cambio de lote de sueros multicalibradores y
  reactivos, realizar nueva calibración del
  equipo.
• Verificar reactivos que correspondan a la
  prueba pedida y evitar agotamiento de los
  mismos.
• Rechazar muestras hemolizadas e
  insuficientes.
• Muestras que no se preparan el mismo
  día, refrigerar a 4ºC.
• Confirmar la linealidad de la prueba y si es
  necesario realizar las diluciones
  respectivas.
• Asegurar el mantenimiento del equipo.

EXPRESION DE RESULTADOS.

En el laboratorio las GOT se expresan en
U/L

5.10. FOSFATASA ALCALINA (ALP)

Esta enzima hidroliza los fosfatos
orgánicos en fosfato inorgánico y ña
fracción orgánica. Es una enzima muy estable y
puede ser congelada con poca o ninguna pérdida de
actividad se halla gran cantidad en el hígado,
riñón, mucosa intestinal y hueso. En la
mayoría de los animales, quizá con excepción
del gato se elimina en su forma natural por el hígado por
lo tanto cualquier obstrucción al flujo de la bilis causa
aumento de la enzima en el suero. El problema es determinar la
fuente de esta elevación cuando no es patente la
enfermedad hepática.

Se producen elevaciones de la enzima en el suero,
en enfermedades del bazo, hígado, riñón,
mucosa intestinal o hueso. En la obstrucción biliar se
eleva notablemente, las neoplasias óseas malignas causan a
veces niveles elevados. También se puede elevar la ALP por
una mayor actividad de los osteoclastos durante el crecimiento
del esqueleto, por enfermedades óseas degenerativas en
animales adultos, raquitismo, osteomalacia y en osteosarcoma.
Durante interferencias con la excreción hepática,
debida a una destrucción de las células
hepáticas o a una destrucción del conducto biliar.
Los resultados se interpretan mejor en conjunción con los
niveles de GPT, que generalmente se encuentran aumentados en
estos casos.

RESPONSABLE.

Bacteriólogo.

METODO.

Colorimétrico.

PRINCIPIO.

P-nitrofenilfosfato + H2O en presencia de
fosfatasa alcalina produce fosfato +
P-nitrofenol.

MUESTRA.

Suero o plasma heparinizado.

EQUIPO.

QUIK LAB

REACTIVOS.

1 TAMPON

1 A substrato

CONDICIONES.

El animal debe tener un "ayuno" mínimo de 8
horas.

LINEALIDAD

El método tiene una linealidad de 1492U/I,
valores
superiores a este realizar diluciones 1:10.

PROCEDIMIENTO

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C.

Colocar a temperatura ambiente durante 30
segundos.

Leer muestra por muestra, colocar la muestra en la
cubeta de reacción y presionar la tecla
"START".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones correctivas de
glucosa.

EXPRESION DE RESULTADOS.

Los resultados se expresan en
U/l.

5.11. BILIRRUBINA TOTAL Y
DIRECTA

La bilirrubina es un producto de
degradación de la hemoglobina, formada en las
células reticuloendoteliales del bazo y de la medula
ósea, que es transportada en el torrente circulatorio por
diversas partículas. La bilirrubina libre o no conjugada
no es capaz de atravesar la barrera glomerular del
riñón. Cuando la bilirrubina libre se conjuga con
ácido glucorónico en el hígado, se hace
soluble en agua y es
capaz de atravesar los glomerulos renales. La bilirrubina
conjugada se excreta normalmente a través de la bilis. Si
la conjugación y excreción en el hígado son
normales el nivel sérico de bilirrubina total será
de 1mg/dl. En el laboratorio se realiza para bilirrubina 2
pruebas, la
bilirrubina total (conjugada y no conjugada) y la bilirrubina
directa (conjugada).

La bilirrubina total aumenta si la
destrucción de eritrocitos aumenta o si la
conjugación de bilirrubina en el hígado es
defectuosa.

La bilirrubina directa aumenta si la
excreción de bilis disminuye.

En la hepatitis aguda
la bilirrubina total esta aumentada, en la cirrosis
hepática aumenta la bilirrubina total y la bilirrubina
directa.

BILIRRUBINA TOTAL

RESPONSABLE.

Bacteriólogo.

METODO.

Método del Acido Sulfanílico
Diazotado.

PRINCIPIO.

La bilirrubina total (conjugada y no conjugada)
reacciona en medio ácido con el ácido
sulfanílico diazotano, en presencia de aceleradores
formando un azocompuesto de color
azul.

MUESTRA.

Suero o plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUIK LAB

REACTIVOS.

1 Nitrito sódico.

1 A ácido
sulfanilico/HCL/aceleradores.

La solución 1 es estable hasta por 4
semanas entre 2 y 8°C y durante 3 días entre 15 y
25°C, si se guarda en el vial original y se protege de la
luz
directa.

CONDICIONES.

"Ayuno" de 8 horas, el ayuno prolongado produce
aumento de la bilirrubina porque parte de esta, que se almacena
en el tejido adiposo, se libera durante la lipolisis y sale a
circulación.

El uso de torniquete no debe prolongarse mas de 30
segundos.

LINEALIDAD.

El método es lineal hasta 30 mg/dl, para
concentraciones mayores realizar diluciones
1:2.

PROCEDIMIENTO.

Preparar el fotómetro a una temperatura de
37°C.

Incubar a 37°C por 3 min o a temperatura
ambiente por 5 min.

Leer en 1 hora.

Colocar los blancos y presionar tecla "BLANK",
colocar las muestras y presionar tecla
"ANALYSE".

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones correctivas de
Glucosa.

INTERFERENCIAS.

La luz directa solar
a temperatura ambiente causa disminución de la bilirrubina
en 50% en el intervalo de una hora.

Soluciones de limpieza del material como el
hipoclorito y dextran pueden producir turbidez que no se puede
corregir completamente por medio de un blanco, aumentando
los
valores.

Las muestras hemolizadas dan lugar a resultados
falsamente bajos en este análisis.

EXPRESION DE RESULTADOS.

En el laboratorio los resultados se expresan en
mg/dl.

BILIRRUBINA DIRECTA

RESPONSABLE.

Bacteriólogo.

METODO.

Método del ácido sulfanilico
diazotado.

PRINCIPIO.

La bilirrubina directa (conjugada) reacciona en
medio ácido con ácido sulfanilico diazotado,
formando un azocompuesto de color azul.

MUESTRA.

Suero o plasma con EDTA.

EQUIPO.

QUIK LAB.

REACTIVOS.

1 Nitrito sódico.

1 A ácido
sulfanilico/HCL.

La solución 1 es estable hasta por 4
semanas entre 2 y 8°C y durante 3 días entre 15 y
25°C, si se guarda en el vial original y se protege de la
luz
directa.

CONDICIONES.

"Ayuno" de 8 horas, el ayuno prolongado produce
aumento de la bilirrubina porque parte de esta, que se almacena
en el tejido adiposo, se libera durante la lipolisis y sale a
circulación.

El uso de torniquete no debe prolongarse mas de 30
segundos.

LINEALIDAD.

El método es lineal hasta 15mg/dl de
bilirrubina directa, para concentraciones mayores realizar
diluciones 1:2.

PROCEDIMIENTO.

Preparar el fotómetro a temperatura
ambiente o a 37°C.

Incubar a 37°C por 2 minutos o a temperatura
ambiente por 5 min.

Colocar el blanco y presionar tecla "BLANK",
colocar las muestras y presionar tecla "ANALYSE". En absorbancia
a una longitud de onda de 570nm.

ACCIONES CORRECTIVAS PARA RESULTADOS
INACEPTABLES.

Ver acciones de Glucosa.

INTERFERENCIAS.

La luz directa solar a temperatura ambiente causa
disminución de la bilirrubina en 50% en el intervalo de
una hora.

Soluciones de limpieza del material como el
hipoclorito y dextran pueden producir turbidez que no se puede
corregir completamente por medio de un blanco, aumentando
los
valores.

Las muestras hemolizadas dan lugar a resultados
falsamente bajos en este análisis.

EXPRESION DE RESULTADOS.

Los resultados en el laboratorio se expresan en
mg/dl.

6. QUIMICA SANGUINEA
VETERINARIA

VALORES DE
REFERENCIA

NOTA : LOS VALORES DE
REFERENCIA DE ACIDO URICO SOLO TIENEN RELEVANCIA EN CANINOS Y SON
LOS SIGUIENTES: MACHOS ADULTOS: 0.30 – 1.10 mg/100
ml

HEMBRAS ADULTAS: 0.10 -1.50 mg/100
ml

BIBLIOGRAFIA

William Medway, D.V.M., ph.d., James
E. Prier, John S. Wilkinson, Patología Clínica
Veterinaria, editorial UTEHA, México,
1990.

B. M. Bush, Manual del Laboratorio Veterinario de
Análisis Clínicos, editorial ACRIBIA Zaragoza
España,
1982.

Maxine M. Benjamin, Compendio de Patología
Clínica Veterinaria.

Editorial IOWA state university press.
1962.

K.V.F Jubb, Peter C. Kennedy, Patología de
los animales domésticos. Editorial LABOR.
1973.

Autor:

WILDEMAN ZAPATA BUILES

HOLTMAN DEIVER FAJARDO RINCON