UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Licenciatura en Ciencias Biológicas

Introducción a la Biología Molecular y Celular

TRABAJO PRÁCTICO 1 y 2
“Preparación de DNA plasmídico”
“Electroforesis en geles de agarosa”

-2012-

OBJETIVO

El objetivo del experimento es la purificación de DNA plasmídico -específicamente, pBluescript de alto numero de copias proveniente de una colonia de bacterias de Escherichia Coli- para la posterior visualización de sus moléculas con el método de electroforesis. Luego analizar y distinguir las diferentes formas y longitud en pares de bases de estas moléculas.

INTRODUCCIÓN

Los plásmidos son moléculas circulares extracromosómicas de DNA doble …ver más…

Una última aclaración necesaria es que generalmente, podemos manejar el tamaño del poro regulando el porcentaje de agarosa en gel. Cuanto más agarosa haya mas pequeño será el poro y viceversa. Es muy importante que esto pueda hacerse ya que muchas veces, que el poro sea o muy chico o muy grande dificulta la diferenciación entre moléculas que tienen longitud de pb similares (pero no iguales). Por ejemplo, si tenemos una molécula de 3000 pb y otra de 4000 pb y los poros son muy pequeños probablemente la diferencia entre sus tamaños no sea reflejada en la velocidad de migración de estas moléculas ya que a ambas le cuesta prácticamente lo mismo “pasar” a través de ese poro. Sería mejor poder regularlo y aumentar un poco su tamaño para que la más pequeña pueda tener el camino más libre y separarse de la otra quedando plasmado en el experimento que su velocidad es mayor.

PROCEDIMIENTO

Materiales utilizados:

(Primera parte del trabajo) ✓ 0,3 ml Solución 1 : Tris-Hcl 50 mM, EDTA 10 mM y pH 8 ✓ 0,3 Solución 2: NaOH 200 mM y SDS 1% ✓ 0,3 Solución 3: KAcO 3 M Ph 4.8 en hielo ✓ Pipetas automáticas, de diferentes medidas ✓ Tubos eppendorf ✓ Aparato centrifugador ✓ Isopropanol ✓ Etanol 70 % (Segunda parte del trabajo) ✓ Solución de agarosa: Agarosa 0.8%, Bromuro de etidio 10 mg/ml, TAE 1X ✓ Buffer de siembra 3X: Xilene