UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE
FACULTAD DE QUÍMICA Y BIOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BILOGÍA CELULAR

PREPARACIÓN DE FANTASMAS DE ERITROCITOS Y ANÁLISIS DE PROTEINAS DEL CITOESQUELETO DE ERITROCITOS.

Autores Marmolejo Olea, Natalia Salvo Rojas, Pamela
Mail de contacto natita_2004@hotmail.com pamelis_salvis@hotmail.com

Introducción

Las células eucariotas poseen un armazón proteico filamentoso desplegado por todo el citosol, llamado citoesqueleto. El cual está integrado por: filamentos intermedios, microtúbulos y filamentos de actina, además de un conjunto de proteínas accesorias que se clasifican como reguladoras, ligadoras y motoras. Las proteínas reguladoras controlan el …ver más…

Las proteínas no tienen una estructura predecible, por tanto sus velocidades de migración no son similares entre ellas. Incluso puede que no migren ni al aplicar una fuerza electromotriz (al encontrarse en su punto isoeléctrico). En estos casos, las proteínas se desnaturalizan mediante la adición de un detergente como el dodecilsulfato sódico y un agente reductor como el b-mercaptoetanol. Los detergentes otorgan una carga neta negativa a la proteína que les permite migrar a través del gel de poliacrilamida en relación directa a su masa, ya que la cantidad de cargas negativas que se unen a la proteína depende del tamaño de ésta, existiendo una relación carga/masa similar. Por otro lado, el agente reductor rompe los enlaces disulfuro, separando a la proteína en sus sub-unidades. Además, la desnaturalización hace que pierdan su estructura terciaria y cuaternaria por tanto su velocidad de migración es proporcional al tamaño y no a su estructura terciaria ni a su interacción con otras macromoléculas. Así, los más grandes se desplazan más lentamente.

El objetivo de esta experiencia es conocer a fondo como se constituye y que función tiene el citoesqueleto en las células eucariontes y mediante distintos tipos de aislamiento de proteínas, lograr identificar cuales son las proteínas asociadas al citoesqueleto que cumplen sus funciones de vital importancia para la célula. Entre estas técnicas de separación de proteínas, tomaremos mayor atención a