TRABAJO PRÁCTICO 4
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA α-AMILASA

N° Grupo: 4
Turno: TP 4 Miércoles 14-18hs
Introducción:
Las enzimas son moléculas de naturaleza no necesariamente proteica que catalizan reacciones químicas. La actividad que catalizan las enzimas se realizan sobre moléculas llamadas sustratos, que dan como origen de la catálisis moléculas diferentes llamadas productos. El estudio de la actividad enzimática se realiza observando el efecto que tiene dicha enzima sobre determinado sustrato, midiendo la desaparición del mismo o la aparición del producto esperado. Este mismo principio se usó para determinar la actividad de la enzima α-amilasa, además de su caracterización. El almidón está formado por amilosa y amilopectina- …ver más…

Para esto se tomó como “tiempo cero” o “t=0” el momento en que se agregó 1ml de saliva diluida a la solución conteniendo almidón. A partir de éste momento se empezó a cronometrar el tiempo transcurrido hasta que desapareciera el color. Cada 30 segundos se retiraron del tubo de reacción (solución de almidón con saliva) 3 gotas o 150 µl usando una micropipeta a cada uno de los tubos de revelado conteniendo lugol. Se realizó éste procedimiento hasta que el agregado de las gotas de la solución de almidón con saliva en el lugol no diera más color azul. Se registró la desaparición del color a los 4 minutos, como se indicó anteriormente.

Habiendo obtenido el tiempo de referencia, se realizó la caracterización de la α-amilasa. La caracterización se puede obtener midiendo la actividad de la enzima cuando ha sido sometida a distintos tratamientos. Nuestro grupo trabajó midiendo el efecto del NaCl sobre la actividad enzimática en una experimentación y el efecto de la proteínasa K.
Resultados:
Grupo pH Dilución t (referencia)
Pre-tratamiento / Incubación t (pre-tratamiento/incubación)
1
7
1/15
6’ pH 12 s/c 70°C s/c 2
7
1/10
3’ 30’’
0°C
s/c (hasta 5’)
3
7
1/5
3’
100°C
s/c

T° ambiente
2’
4
7
1/10
4’
Prot K s/c NaCl
T° ref NaCl: 5’ 30’’

T° ref control: s/c
5
7
1/50
4’ 30’’ pH 2 s/c RNasa
4’ 30’’

T° ambiente
6’ 30’’

Tabla 1: