UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA SEDE MEDELLÍN FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE QUIMICA

EXTRACCIÓN DE LA TIROSINASA Y DETERMINACIÓN DE SU ACTIVIDAD EN ALGUNOS VEGETALES.

OBJETIVOS:

• Extraer la enzima tirosinasa de diferentes fuentes (banano, manzana y papa). • Determinar la actividad de la tirosinasa, usando como sustrato L-DOPA. • Comparar la actividad de la enzima en diferentes fuentes y bajo diferentes condiciones: calentamiento y en presencia de un inhibidor (NaCN).

MARCO TEORICO.

1 PARDEAMIENTO ENZIMATICO.

La coloración café oscuro que se va formando en la superficie de algunas frutas y vegetales cuándo se cortan, se denomina pardeamiento, y se debe a la …ver más…

Ello significa que:

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Si se conoce con precisión la concentración molar de la enzima usada, la expresión anterior se llamará actividad molar (o molecular) de la enzima:

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Este valor representa las moles de sustrato que es capaz de transformar en producto una mol de enzima en la unidad de tiempo. Ello recibe el nombre de número de recambio, número de transformación, o simplemente actividad molar de la enzima.

Si no se conocen las cantidades exactas de las enzimas empleadas, se puede usar como factor de comparación el volumen de los extractos enzimáticos preparados en condiciones similares; no se podrá hablar de actividad molar, sino simplemente de actividad enzimática:

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Con esta expresión se pretende comparar la eficiencia de varios extractos enzimáticos, al cuantificar las moles de sustrato que es capaz de transformar en producto, un mililitro de un extracto en la unidad de tiempo.

MATERIALES Y REACTIVOS

• Solución buffer de fosfato 0.1M a pH = 7.2. • Solución buffer de fosfato 0.1M a pH = 6.0. • Solución de L-DOPA 0.03M en buffer a pH = 6.0. (Se disuelve una cápsula de L-DOPA en 50 ml de buffer para que quede con una concentración de [pic](0.03M)). • Fuente de tirosinasa (banano, manzana y papa). • Arena lavada con ácido (para triturar el vegetal). • Lienzo