“Bioensayo tiempo de retención del rojo neutro (Eisenia fetida).”

INTRODUCCIÓN

Los organismos vivos integran el efecto tóxico causado por la exposición a diferentes xenobióticos o contaminantes, y responden de manera integral en sus diferentes niveles de organización (subcelular, celular, tejidos, órganos y sistemas) al efecto adverso de compuestos o mezclas de ellos. Los bioensayos proveen una medida más directa de la toxicidad ambiental relevante en los sitios contaminados que los análisis químicos, ya que integran la respuesta de los factores ambientales y de los compuestos tóxicos. La citotoxicidad de los compuestos puede ser determinada a través de pruebas …ver más…

3. Se obtuvieron 6 lombrices para la exposición, seleccionando las adultas cliteliadas, con un número de 2 por réplica.

4. Preparación de reactivos: - Solución Ringer: En un litro de agua destilada disolvieron 6g de NaCL, 0,12 gr de KCL, 0,2 gr de CaCL2 y 0,1 gr de NaHCO3 (Harreus et al., 1997) - Solución Rojo Neutro: Primero se preparó una solución Stock de rojo neutro. Se disolvieron 20 mg de rojo neutro en 1mL de DMSO. De esta solución stock se extrajeron 10 µL y se depositaron en 2.5 mL de Solución Ringer. Obteniendo así la solución de trabajo de Rojo Neutro a una concentración de 80 [µg/mL].

5. Una vez finalizado el periodo de exposición (48 horas), se tomaron una a una las lombrices para el siguiente procedimiento: - Se depositaron sobre un papel absorbente para retirar el exceso de líquido. - Se extrajeron 20 µL de Solución Ringer preparada anteriormente, en una jeringa de 1 mL y luego se extrajeron 20 µL de fluido celómico, insertando la aguja justo detrás del clitelio, cercano a la zona abdominal. - De esta mezcla se depositar 5 - 10 µL en el portaobjeto, dejando adherir los celomocitos a este por 30 segundos y luego agregando 20 µL de solución rojo neutro. - Se observaron bajo el microscopio de luz por un intervalo de dos minutos, manteniendo la muestra en la cámara húmeda, para evitar la cristalización del rojo neutro. - Finalmente se detuvo el tiempo cuando el nº de células observadas