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Laboratorio de Biología Molecular

Departamento de Laboratorios Clínicos

Facultad de Medicina

Pontificia Universidad Católica de Chile

DIAGNOSTICO RAPIDO DE ANEUPLOIDIAS DE LOS CROMOSOMAS 13, 18, 21 y SEXUALES EN LIQUIDO AMNIOTICO Y EN SANGRE PERIFERICA DE RECIEN NACIDOS UTILIZANDO LAS TECNICAS DE FISH Y PCR FLUORESCENTE

FELIPE IGNACIO ARANIS AQUEVEQUE

Director de tesis: Dra. Marcela Lagos Lucero

Mayo 2010

Memoria Profesional entregada a la Facultad de Ciencias Biológicas de la Pontificia Universidad Católica de Chile, en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Bioquímico

AGRADECIMIENTOS

En primer lugar, quiero agradecer al Laboratorio de Biología …ver más…

INDICE DE MATERIAS iii

INDICE DE TABLAS vi

INDICE DE FIGURAS vii

NOMENCLATURA viii

RESUMEN x

ABSTRACT xi

INTRODUCCION 1

OBJETIVOS 9

Objetivo general 9

Objetivos específicos 9

MATERIALES 10

Extracción de ADN 10

Amplificación de STR 10

Electroforesis capilar con detección fluorescente 12

Análisis de los productos de PCR 13

Disgregación de líquidos amnióticos 13

FISH 14

METODOS 16

Obtención de muestras 16

Almacenamiento de muestras 16

Extracción de ADN 17

Cuantificación de ADN 17

Amplificación de STR 18

Electroforesis capilar con detección fluorescente 20

Análisis e interpretación de resultados de PCR 20

Determinación de la utilidad de los marcadores del kit AneufastTM 21

Preparación y almacenamiento de soluciones para disgregación y FISH 21

Disgregación de líquidos amnióticos 24

FISH 26

Análisis e interpretación de resultados FISH 31

RESULTADOS 32

Estandarización de protocolo para QF-PCR 32

Análisis de muestras clínicas por QF-PCR 43

Utilidad de los marcadores utilizados en QF-PCR 45

Estandarización de protocolo para FISH 47