Efecto de algunos reguladores del crecimiento y el Fitomás-E en la micropropagación de Musa sp. variedad FHIA-18 (AAAB) (página 2)

Experimento 1. Efecto del BAP en la
multiplicación in vitro del FHIA-18.

Con el objetivo de
evaluar el efecto del BAP en la multiplicación in
vitro del cultivar de banano FHIA-18. Como medio de cultivo
se empleó sales (MS), tiamina 1,0 mg.l-1,
sacarosa 3,0 % y BAP (0,0; 2,0; 4,0; 6,0) mg.l-1. Las
variables
evaluadas fueron: coeficiente de multiplicación,
número de brotes, longitud del brote (cm) y número
de raíces. La determinación de la longitud del
brote se realizó midiendo desde la base hasta el
ápice de hoja principal, para ello se utilizó una
regla milimetrada. El coeficiente de multiplicación se
determinó: Coeficiente de multiplicación =
Número total de brotes entre número inicial de
brotes.

Experimento 2. Efecto del Fitomás-E en la
multiplicación in vitro del FHIA-18.

Este experimento se realizó, con el objetivo de
evaluar la influencia de diferentes concentraciones del
Fitomás-E en el medio de cultivo combinado con 4,0
ml.l-1 BAP. Se empleó como medio de cultivo
sales (MS), tiamina (1,0 mg.l-1), sacarosa (3,0%),
suplementado con Fitomás-E a concentraciones (0,1; 0,5;
1,0) ml.l-1 solos y combinados con BAP (4,0
mg.l-1). Variables evaluadas: coeficiente de
multiplicación, número de brotes, longitud del
brote (cm), número de raíces y longitud de la
raíz (cm).

Experimento 3. Influencia del Fitomás-E y el
AIA en el enraizamiento in vitro.

Se desarrolló con el objetivo de evaluar el
efecto del Fitomás-E solo y en combinación con el
AIA durante el enraizamiento in vitro. El medio de cultivo
estuvo compuesto por sales (MS), sacarosa 4,0 %, AIA 1,3
mg.l-1 solo o combinado con Fitomás-E (0,1;
0,5) ml.l-1. Variables evaluadas: número de
raíces, longitud de la raíz (cm), número de
hojas y longitud de la vitroplanta (cm).

Experimento 4. Determinación de la influencia
del Fitomás-E y el ANA en la
aclimatización.

Con el objetivo de determinar la influencia de la
imbibición de las raíces en la
aclimatización de las plantas de banano
FHIA-18 en condiciones ex vitro. La inmersión de
las raíces se realizó durante 24 horas en agua destilada
y luego 10 minutos en los siguientes tratamientos: T1
ANA (10 mg.l-1); T2 (agua común);
T3 Fitomás-E (0,1ml.l-1);
T4 Fitomás-E (0,5 ml.l-1);
T5 Fitomás-E (1,0 ml.l-1). Se
emplearon bandejas de polieturano de 70 alveolos con un sustrato
artificial que contenía 75,0% de suelo pardo con
carbonato y 25,0% de materia
orgánica de origen bovino, en condiciones de casa de
cultivo protegida con un cobertor y reducción del 75% de
la intensidad luminosa. El riego se efectuó diariamente y
manteniendo ente 85 – 90 % de humedad relativa. Fueron evaluadas
las variables: supervivencia (%), altura de la planta (cm) y
número de hojas. Para determinar el índice de
supervivencia se empleó la ecuación matemática: Supervivencia = Total de
plantas vivas por 100 entre el total de plantas
iniciales.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN.

Experimento 1. Efecto del BAP en la
multiplicación in vitro del FHIA-18.

En cuanto al número de brotes y el coeficiente de
multiplicación (Tabla 1), se demostró que con 4,0
mg.l-1 se alcanzó un coeficiente de
multiplicación de 2,48 brotes por explante así como
un crecimiento vigoroso de los brotes lo cual difiere
significativamente del resto de los tratamientos.

Tabla 1. Efecto de las concentraciones de BAP en el
coeficiente de multiplicación del FHIA-18.

Letras diferentes difieren significativamente a
través de la prueba de Tukey para
p<0,05.

Se evidenció que los tratamientos con BAP
superaron al control, lo cual
demuestra que aunque los brotes en crecimiento pueden sintetizar
pequeñas cantidades de citoquininas, esta es insuficiente
para su crecimiento y desarrollo
in vitro, necesitando de aplicaciones exógenas que
permitan romper la dominancia apical y estimular la
brotación de las yemas.

Según Gübbük y Pekmezci (2004), se ha
observado que con 2,48 mg.l-1 BAP en el medio de
cultivo, se obtiene un incremento promedio de 2,4 brotes por
explante, recomendándose como concentración
óptima 4,50 mg.l-1 para la
micropropagación de bananos

Se observó que el BAP tuvo una influencia
significativa tanto en la multiplicación como en la
elongación de los brotes. A medida que se
incrementó la concentración del BAP existió
una disminución progresiva en la longitud del brote,
existiendo superioridad del testigo con respecto al resto de los
tratamientos para este indicador, lo cual parece indicar que al
aumentar la concentración de BAP esta influye en mayor
medida sobre la multiplicación (Tabla 2) y no sobre el
alargamiento celular, observándose en el tratamiento
control el menor número de brotes, confirmando que existe
una respuesta inversa entre el número de brotes y el
crecimiento de estos.

Tabla 2. Efecto de diferentes concentraciones de BAP
en el número y longitud de las raíces en brotes de
FHIA-18.

Letras diferentes en una misma columna difieren
significativamente por Tukey para p<0,05.

En cuanto al número de raíces formadas por
explante, es una condición desfavorable pues se consumen
reservas nutricionales que pudieran ser utilizadas en el
desarrollo y multiplicación de los brotes. Se
observó que con el aumento del BAP se produjo un
decrecimiento en la emisión de raíces, lo cual
debió estar dado por un desvalance en la proporción
auxina-citoquinina, favorable a la citoquinina que interviene en
el crecimiento apical de los brotes. Obviamente se alcanzó
el mayor número de raíces en el tratamiento control
donde no se aplicó ningún regulador del
crecimiento, demostrándose que los ápices y
meristemos son zonas de síntesis
de auxinas a partir de la cual se trasladan a la zona basal para
estimular la emisión de raíces.

2. Efecto del Fitomás-E en la
multiplicación in vitro del FHIA-18.

El empleó de diferentes tipos de bioestimulantes
en el cultivo de tejidos vegetales
es ampliamente divulgado en la literatura actual. En la
(Tabla 3) los resultados indican que para las concentraciones
evaluadas se alcanzó un ligero incremento en el
coeficiente de multiplicación a concentraciones de 0,5 y
0,1 ml.l-1 del bioestimulante, así como en la
combinación de 1,0 ml.l-1 de Fitomás-E
con (4,0 mg.l-1) BAP aunque en este último
tratamiento el efecto pudo haber estado
influenciado en mayor medida por la citoquinina.

Tabla 3. Efecto del Fitomás-E y el BAP
en el número de brotes y coeficiente de
multiplicación del FHIA-18.

Letras diferentes difieren
significativamente a través de la prueba de Tukey para
p<0,05.

En comparación con los resultados obtenidos con
utilización del BAP, se observó una
disminución en la formación de nuevos brotes lo
cual pudo haber estado dado a que en bananos este efecto
estimulador del Fitomás-E no se ha producido con las
concentraciones evaluadas. A su vez esto pudo deberse a un efecto
inverso entre el Fitomás-E y las citoquininas, teniendo en
cuenta que su composición química está
dada fundamentalmente por aminoácidos que causan
incrementos en el crecimiento apical del tejido, limitando el
efecto de multiplicación de las citoquininas.
Domínguez y Da Silva (2006), observaron una
reducción en la tasa de multiplicación a partir del
cuarto subcultivo en varios genotipos.

También se observó que la
aplicación del Fitomás-E en el medio de cultivo
permitió un ligero incremento en la longitud de los brotes
en todos los tratamientos evaluados, sin embargo, todo lo
contrario ocurrió en los variables radiculares donde hubo
una disminución en su proliferación y crecimiento
con respecto a los tratamientos con BAP evaluados en el
experimento anterior. Se muestró un desarrollo vigoroso en
la región apical, engrosamiento del tallo y emisión
de hojas cuticularmente gruesas lo cual fue más evidente a
concentraciones entre 0,5 y 1,0 ml.l-1 de
Fitomás-E. Fue observada la presencia de pequeños
puntos cloróticos que en ocasiones llegaron a formar
tejidos necróticos en el ápice de las hojas, dado
por la presencia de compuestos ácidos.

Este experimento aporta nuevos resultados para el
cultivo de tejidos vegetales, pues en la literatura consultada no
se hace referencia sobre la utilización de este
bioestimulante en el cultivo in vitro.

Como resultado se evidenció un efecto inverso
entre el Fitomás-E y el BAP para las concentraciones
estudiadas; en el caso de bioestimulantes como los
brasinoesteroides son mucho más efectivos a muy
pequeñas concentraciones por lo que en combinación
con citoquininas pueden obtenerse buenos resultados para el
coeficiente de multiplicación con la consiguiente
disminución en la emisión de raíces y el
crecimiento del brote, lo cual se aprecia a concentración
de 0,1 ml.l-1 de Fitomás-E combinado con 4,0
mg.l-1 de BAP.

Se observó que con 0,5 ml.l-1 se
producía un incremento en la coloración verde
intensa de las hojas, sin embargo a 1,0 ml.l-1 se
comprobó un incremento en la muerte del
tejido.

3. Influencia del Fitomás-E y el AIA en el
enraizamiento in vitro.

Este experimento (Figura 2) muestra la
influencia de los estimuladores del crecimiento Fitomás-E
y ácido indol-3-acético, en la inducción de raíces. Se observa que
donde se empleó el AIA no se observó diferencias
estadísticas entre ellas, sin embargo,
superaron a los tratamientos con solo la presencia del
bioestimulante en estudio. Lo cual demuestra el papel que juegan
las auxinas en la estimulación del sistema radicular
en las plantas.

T1: 0,1 ml.l-1 Fitomás-E

T2: 0,5 ml.l-1 Fitomás-E

T3: 0,1 ml.l-1 Fitomás-E y 1,3
mg.l-1 AIA

T4: 0,5 ml.l-1 Fitomás-E y
1,3mg.l-1 AIA

T5: 1,3 mg.l-1 AIA

MG±EE = 4,36±0,20

Letras diferentes difieren estadísticamente
por la prueba de Tukey p<0,05.

Figura 2. Efecto de diferentes concentraciones y
combinaciones del Fitomás-E con el AIA en el número
de raíces del cultivar FHIA-18 a los 28 días en
fase de enraizamiento.

Núñez (2000), observó que el
Biobrás-6 en concentraciones de (0,01 – 0,05)
mg.l-1 en combinación con el AIA 1,3
mg.l-1 durante la fase de enraizamiento de
plátanos y bananos, provocó un reforzamiento
auxínico. Sin embargo, en este estudio no se
encontró diferencia significativa entre el tratamiento
cinco con respecto a los tratamientos tres y cuatro lo que indica
que para las concentraciones estudiadas de este bioestimulante su
incorporación no produjo un efecto adicional al producido
por el AIA.

El efecto producido en los tratamientos uno y dos donde
se alcanzaron los menores valores en
cuanto al número de raíces emitidas pudiera haber
estado influenciado por el efecto residual o acumulativo del BAP
adicionada durante los diferentes subcultivos en la fase de
multiplicación, la cual ejerció un efecto
inhibitorio en la formación de raíces. Es posible
que transfiriendo los brotes durante dos subcultivos en medio de
cultivo de enraizamiento o en un medio de cultivo libre de
reguladores del crecimiento se hubiera logrado una
liberación de las concentraciones endógenas del BAP
producida durante el cultivo in vitro y por ende se
incrementara el número de raíces.

Durante esta etapa se incrementó la
concentración de sacarosa a 4,0 % para preparar a las
vitroplantas para su posterior trasplante al suelo, ya que un
incremento del contenido de sacarosa, permite soportar en
estrés
hídrico motivado por las condiciones de mayor presión
osmótica, unido a una mejor constitución morfológica de la
vitroplanta.

Los tratamientos cinco y cuatro respectivamente
mostraron para los indicadores
longitud de la raíz y longitud total de los brotes, que
las concentraciones de Fitomás-E a pesar de no tener una
influencia marcada en la emisión de raíces
favoreció el crecimiento apical de las vitroplantas, sin
embargo, no se manifestó diferencias significativas entre
el número de hojas emitidas lo cual indica que al
favorecer el crecimiento apical existió una mayor longitud
en los entrenudos cuando se aplicó el
bioestimulante.

Estos resultados corroboran lo planteado López
et al. (2002), quienes lograron con 0,5 % de
Fitomás-E en condiciones de campo, incrementar en
Lactuca sativa cv. R-SS-13 en un 20 % la longitud del
tallo, lo cual parece estar dado por la elevada
concentración en elementos nutricionales, así como
la presencia de auxinas y aminoácidos cuya función
puede incidir tanto en el sistema foliar como en el mejoramiento
de la fertilidad del suelo.

4. Determinación de la influencia del
Fitomás-E y el ANA en la
aclimatización.

Las condiciones in vitro provocan cambios
anatómicos y fisiológicos que repercuten en la
supervivencia de las plantas en condiciones ex vitro. A
los 15 días posteriores a la plantación se
observó en el tratamiento (1) un 92,63 % de supervivencia,
seguido de un 80,0 % en los tratamientos (3 y 4) con empleo del
Fitomás-E (0,1 y 0,5) ml.l-1 respectivamente
(Figura 3).

T1: 10,0 mg.l-1 ANA

T2: Agua común

T3: 0,1 ml.l-1 Fitomás-E

T4: 0,5 ml.l-1 Fitomás-E

T5: 1,0 ml.l-1 Fitomás-E

Letras diferentes difieren
significativamente por la prueba de proporción binomial
para p < 0,05.

Figura 3. Supervivencia de las plantas de
FHIA-18 a los 15 y 30 días en fase de
aclimatización.

Esto demuestra que este producto para
estas concentraciones estimula tanto el crecimiento de las
plantas así como que permite crear una mayor resistencia a las
condiciones estresantes del medio
ambiente.

En estudios realizados por Galindo et al. (2004)
con el bioestimulante (Biobrás-6) durante la fase de
aclimatización, obtuvieron en los primeros 15 días
del trasplante que el porcentaje de supervivencia no
difirió entre los tratamientos, sin embargo, a los 45
días los tratamientos con bioestimulante superaron al
testigo, resultando la concentración de 0,005
mg.l-1 la que mejor se comportó. En nuestros
resultados se observó que el tratamiento con ANA y el
tratamiento con 0,1 ml.l-1 de Fitomás-E, fueron
muy similares a los 15 y 30 días.

Montano et al. (2002), trabajando con semillas de
Cucumis sativus L. cv. SS-5, observó que al inhibir
las semillas durante 24 horas antes de la siembra se lograba un
incremento en el porciento de germinación resultando la
mejor concentración con 1,0 ml.l-1 de
Fitomás-E.

Es conocido el efecto estimulador del crecimiento con la
aplicación de AIA en diversos cultivos lo cual esta dado
por su efecto en la estimulación de formación de
raíces, donde al aumentar en número y calidad permite
una mejor asimilación de los nutrientes del suelo con la
consiguiente adaptación de las plantas.

En cuanto al indicador altura de la planta, se
observó que el tratamiento con ANA favoreció el
crecimiento de las plantas superando al resto de los
tratamientos, entre los cuales no se encontraron diferencias
significativas con respecto al tratamiento control, solamente el
tratamiento con 0,5 ml.l-1 de Fitomás-E a los
30 días no mostró diferencias significativas con
respecto al tratamiento con ANA.

En cuanto al indicador número de hojas se
observó que tanto a los 15 y 30 días no hubo
diferencias significativamente evidenciándose la
formación entre uno y dos pares de hojas en todos los
tratamientos.

En resumen con este experimento se evidenció que
el AIA a concentración de 10,0 mg.l-1 y el
Fitomás-E a razón de 0,5 ml.l-1
favoreció el crecimiento y desarrollo de las plantas
durante la fase de aclimatización.

CONCLUSIONES.

• Se logró un coeficiente de
  multiplicación de 2,48 brotes con 4,0 mg.l-1
  de BAP en la multiplicación in vitro.
• Se alcanzó un coeficiente de
  multiplicación de 1,50 brotes con 0,1 ml.l-1
  de Fitomás-E y 4,0 mg.l-1 BAP, no existiendo
  diferencias altamente significativas con 0,5 y 1,0
  ml.l-1 de Fitomás-E.
• Se incrementó el número de
  raíces con 1,3 mg.l-1 AIA solo y en
  combinación con (0,1 y 0,5) ml.l-1
  Fitomás-E respectivamente.
• La inmersión de las raíces en
  Fitomás-E (0,1 ml.l-1) y ANA (10,0
  mg.l-1) respectivamente favoreció la
  aclimatización de las plantas.

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del Ecuador.
[en línea] <http:// www.sica.gov.ec

> [Consulta: 9 abril 2007].

Biografía del autor
principal:

Jorge Liusvert Pérez
Pérez

Ciudad de nacimiento: Bayamo, Granma.

País: Cuba

Títulos académicos: – Ingeniero
Agrónomo. Universidad de Granma. 2002.

– Master en Biotecnología Vegetal,
2006.

Ocupación: Profesor
Universitario.

País, ciudad y fecha correspondientes al
trabajo
realizado.

País: Cuba, Ciudad de Bayamo, Provincia de
Granma.

Fecha: Enero-Mayo, 2007.

Effect of some growth regulators and Fitomas-E in the
micropropagation of Musa sp. variety FHIA-18 (AAAB).

Jorge Pérez Pérez*,

Jairo Arroyo Jurado**,

Daniel Sánchez Ami**,

Sergio Rodríguez
Rodríguez*,

Angel Espinoza Reyes*,

Lillien fajardo Rosabal*,

Bárbara Rodríguez***.

* Centro de Estudios de Biotecnología Vegetal,
Universidad de Granma. Carretera vía Manzanillo, km
17½ Peralejo, Bayamo, Granma, Cuba.

** Universidad Técnica de Cotopaxi,
Ecuador.

*** Instituto Cubano de Investigaciones
de los Derivados de la Caña de Azúcar,
Cuba.