Antagonismo microbiano a: Pantoea agglomerans y Pseudomonas syringae

1. Resumen
2. Introducción y
   antecedentes
3. Materiales y
   métodos
4. Resultados y
   discusión
5. Literatura
   citada

Resumen

El congelamiento de las hojas en el campo depende de
factores físicos, químicos y biológicos. De
los biológicos se considera a las bacterias activadoras de
núcleos de hielo (BANH) epifitas de la superficie de la
hoja o filoplano. Estas BANH responden al cambio
ambiental como la elevada humedad y la baja temperatura
para "súper enfriarse" internamente y externamente formar
cristales de hielo para evitar que ese fenómeno
físico las aniquile.

En consecuencia los tejidos vegetales
se congelan y la hoja muere. El control
químico y biológico utilizado para reducir la
densidad de
BANH del filoplano y los cristales de hielo, ha generado
resultados inconsistentes. Es necesaria información sobre los microorganismos
nativos antagonistas a las BANH en cultivo de alto valor
económico.

En esta investigación se aislaron
microorganismos epifitos de cítricos, antagonistas a BANH.
Se determinó su efecto inhibitorio sobre el crecimiento de
los ecotipos de BANH en agar nutritivo. Se evaluó el
efecto de estos antagonistas sobre la frecuencia de
nucleación de hielo de las BANH en hojas de naranjo dulce,
naranjo agrio, mandarino y limón. Los resultados muestran
la existencia de microorganismos epifitos de cítricos
antagonistas a las BANH.

Su aplicación en hojas de tales plantas redujo el
daño
por congelamiento entre un 15% a un 100%. Los antagonistas a las
BANH se identificaron como géneros de
Enterobacteraceae y géneros de bacterias Gram
positivas: Escherichia coli, Klebsiella sp.
Bacillus sp. Micrococcus luteus. Así
como una levadura que no se identificó. Se
concluye que estos microorganismos epifitos antagonistas (de
cítricos) pueden ser una alternativa para reducir el
efecto de BANH en cítricos.

Palabras clave: congelamiento, cítricos,
filoplano, epifitas.

Antagonistic microorganisms against ice nucleation
active bacteria: Pantoea agglomerans and Pseudomonas
syringae.

SUMMARY

Leaf frosting in the field depends upon physical,
chemical and biological factors. Among the biological factors are
epiphytic ice nucleation active bacteria (INA) found on the plant
surface or phylloplane. INA responds to environmental changes
like high humidity and low temperatures by supercooling
internally and externally forming ice crystals for survival. As a
result stomates freeze and the leaves die. Chemical and
biological control to reduce INA populations on the phylloplane
has shown variable results therefore, research is needed to find
antagonistic microorganisms in high value crops. In the present
study epiphytic bacteria from citrus trees were used as the
source of native antagonistic microorganisms to ice-nucleating
bacteria (INA).

Their capability to inhibit growth of INA was evaluated
on nutrient agar. The effect of antagonistic microorganisms on
the frequency of the ice nucleation was determined by using
healthy leaves of the sweet and sour orange varieties, mandarin
and lemon trees. The results showed the existence of native
populations of antagonistic against INA bacteria including
Bacillus sp. Enterobacter sp. Escherichia
coli, Klebsiella sp. Micrococcus
luteus, and an unidentified yeast. When antagonistic
microorganisms were applied to the leaves of the healthy citrus
trees, a reduction from 15 to 100 % in the frequency was observed
of the frost damage. It was concluded that antagonic epiphytic
microorganisms are an alternative to reduce frost damage of INA
on citrus trees.

Key words: frost, citrus, phylloplane, epiphytic,
stomata

Introducción y antecedentes.

En el estado de Nuevo León, México en
1988 una helada redujo drásticamente la producción anual de cítricos de 320
mil a sólo 5 mil toneladas. Este daño severo se
asoció a la incidencia de bajas temperaturas, aunque se
cree que influyeron factores biológicos como la densidad
de las BANH, epifitas naturales de una amplia gama de plantas
(Gross et al., 1984; Wilson y Lindow, 1994abc; Taiz y
Zeiger, 1998). Se reporta que cuando las hojas de estas se
exponen a temperaturas de congelamiento durante largos periodos
de tiempo,
aparecen cristales de hielo extracelulares que causan el movimiento de
agua en
estado
líquido del protoplasto al exterior.

Esto provoca una deshidratación aguda si el
congelamiento es rápido, los cristales se forman en el
protoplasto de la célula
vegetal y esta se muere (Hirano, et al., 1985;
Weibell, et al., 1990; Blakeman, 1993; Mariano y McCarter,
1993).

Es evidente que la formación de los cristales de
hielo depende de las propiedades físico-químicas
del filoplano de la planta y del crecimiento de las BANH en esa
zona. Algunas de las proteínas
producidas por las BANH, tienen la función
bioquímica
de alinear las moléculas de agua entre las regiones de
aminoácidos para dar origen a estos cristales (Wilson y
Lindow, 1994c; Wilson et al., 1999).

Lo anterior explica la sensibilidad de las hojas de
cítricos y gramíneas al congelamiento por heladas
tempranas o tardías, asociado con el crecimiento de los
ecotipos de las BANH en su filoplano (Wilson y Lindow, 1993;
Yessad et al., 1994). Cuando la humedad relativa es
superior al 80 % en el ambiente y la
temperatura fluctúa entre el 5oC y
0oC, las BANH sintetizan estas proteínas a
nivel de su membrana e inician la formación de cristales
de hielo hacia el exterior (Sundin y Bender, 1993; Beattie y
Lindow, 1994 abc).

Así congelan las hojas de la planta y causan
pérdida de la producción agrícola como
sucedió en la zona citricola del estado de Nuevo
León. Los géneros de BANH representativos en el
filoplano de plantas son: Pseudomonas syringae Van Hall
(Hirano et al., 1985; Andersen et al., 1991),
P. fluorescens (Mingula) biotipo G (Lindow, 1982;
Lindow et al., 1993), P. viridiflava (Burkholder)
Dawson, P. agglomerans (Lohis) Dya (Lindow et al.,
1982), y P. sterwartii (Lindow, 1983a; Lindow et
al., 1984). El efecto de las BANH puede ser un problema
agrícola difícil de resolver, ya que la propiedad de
formar núcleos de hielo es común entre los
microorganismos nativos del filoplano de plantas
domésticas (Lindow, 1982, 1987) y silvestres (Granados
et al., 2000; 2005) Dado que la actividad de las BANH
causa pérdidas económicas, se intenta reducirla en
los cultivos agrícolas mediante el control químico
con antibióticos de amplio espectro como la estreptomicina
o la oxitetraciclina, así como con metales pesados
del tipo del zinc (Zn2+) o el cobre
(Cu2+), en ambos casos sin resultados satisfactorios
(Lindow, 1983b; Andersen et al., 1991; Stromberg et
al., 1999,2000).

Una alternativa distinta para su control es la
aplicación de microorganismos antagonistas a las BANH
(Lindow y Connel, 1984), como algunos bacteriófagos (Cody
et al., 1987; Mariano y McCarter, 1993; Schnabel y Jones,
1999). En este tipo de tratamientos se reportan resultados
positivos en la disminución del congelamiento de hojas de
maíz,
tomate, peral
y cítricos (Anderson et al., 1984; Cody et
al., 1987; Lindemann y Suslow, 1987), una eficacia relativa
en la reducción del daño por congelamiento de entre
un 60% un 70% (Lindow et al., 1977; 1978; 1981; 1982;
1983b) y sin efectividad cuando la reducción del
daño fue menor al 10% (Lindow et al., 1982; 1983;
Lindow, 1983a).

El antagonismo contra las BANH se induce por
alteración de la ecología microbiana
en el filoplano de la planta (Lindemann y Suslow,
1987; Lindow, 1987; Hirano et al., 1996).

Con microorganismos autóctonos para asegurar la
competencia de
esta población contra los ecotipos de las BANH y
reducir el daño por congelamiento en el sistema foliar de
la planta. Obviamente con aplicación de agentes
químicos se eliminan parcialmente las poblaciones de BANH,
pero causan contaminación ambiental y se afecta
también a las poblaciones de antagonistas (Wilson y
Lindow, 1992, 1993, 1994a). Por otro lado si se seleccionan
microorganismos nativos del filoplano del cultivo vegetal que se
pretende proteger de la población de BANH, esto permite
disminuir el uso de agentes químicos contra las BANH y
minimizar el daño por congelamiento en la hoja, sin causar
contaminación ambiental.

Los objetivos de
este trabajo
fueron: 1) aislar microorganismos nativos de filoplano de
cítricos antagonistas a las BANH: P. agglomerans y
P. syringae; 2) determinar el efecto de estos antagonistas
sobre la actividad de ecotipos de las BANH en hojas de
cítricos.

MATERIALES Y METODOS

I. Origen aislamiento e identificación de los
ecotipos de las BANH de cítricos.

En la primavera de 1992 y 1994 se aislaron del Municipio
de General Terán, N.L. ecotipos de P. agglomerans a
partir de hojas sanas de naranjo dulce (Citrus sinensis
L.) de acuerdo con el procedimiento
descrito por Cody et al., (1987). Las posibles BANH del
filoplano de las plantas se aislaron y cultivaron en agar
nutritivo (AN) por 24 h, posteriormente se suspendieron en 3.0 ml
de cloruro de sodio (NaCl al 1.0% p/v) en agua destilada. Los
ecotipos de las BANH se identificaron según el criterio
del Manual de Bergey
(Buchanan y Gibson, 1994). Se incluyeron dos ecotipos de las BANH
de referencia: P. syringae cepas PssT y PssCB728a donadas
por el Dr. Steven Lindow de la Universidad de
California en Berkeley, CA, EUA.

II. Prueba de activación de núcleos de
hielo de los ecotipos nativos "in vitro".

Para demostrar la capacidad de formación de
núcleos de hielo por los ecotipos de las BANH, se
utilizó la técnica establecida por Hirano et
al. (1985). Los tubos con los ecotipos de las BANH se
colocaron en un congelador (General Electric Mod. RGA-113) a
9°C para determinar su tiempo de congelamiento a intervalos
de cinco minutos, según describen Lindow et al.
(1982) y Wilson y Lindow, (1994b). En este ensayo se
usaron como referencia de las BANH a las cepas y ecotipos de
P. syringae (Psst y PssCB728a) y a los de P.
agglomerans de la colección del laboratorio de
microbiología ambiental del
IIQB-UMSNH.

III. Aislamiento de los microorganismos antagonistas
a los ecotipos de BANH.

Para hojas sanas de cítricos se suspendieron en
matraces Erlenmeyer de 500 mL con 250 mL de amortiguador
de fosfatos 0.1 M, pH 7.0 y 0.01
% de dodecil sulfato de sodio (SDS), los matraces se agitaron a
250 rpm/2h para separar y suspender sin dañar los posibles
microorganismos nativos adheridos a las hojas, antagonistas a las
BANH. El amortiguador se usó para humedecer cuatro discos
de papel filtro (Whatman No.1) esterilizados, de 5 mm de diámetro. Estos se
colocaron sobre la superficie de cajas Petri con agar antagonista
(AA) (g/L): sacarosa 2.0, NaCl 5.0, MgSO4
7H2O 3.0, NH4Cl 5.0 y agar 18.0,
previamente inoculadas con los ecotipos de las BANH P.
syringae y P. agglomerans, después de que cada
una se suspendió en solución salina 0.85% (NaCl
p/v) a una concentración de 106 células/
mL, de acuerdo con el tubo No. 1 de Mac Farland. Cada
suspensión se sembró (0.7/mL) en cajas con AA, que
se incubaron a 30º C/24-48 h como lo reporta Lindow
(1982).

IV. Antagonismo microbiano sobre el crecimiento de
los ecotipos de las BANH "in vitro".

Para detectar la actividad de inhibición del
crecimiento de los microorganismos antagonistas nativos de
cítricos sobre los ecotipos de las BANH se utilizó
la técnica de doble capa recomendada por Lindow et
al. (1982, 1983) y Lindow, (1983ab). En este ensayo se
combinaron 15 mL de AN y 1.0 mL de una suspensión de cada
ecotipo de las BANH a una concentración de 1 x
106 UFC/mL/caja. Posteriormente se agregó una
segunda capa de AN con 15 mL, que se mezclaron con 1.0 mL de los
microorganismos de cítricos antagonistas a la misma
concentración celular de los ecotipos de las BANH. Estas
cajas se incubaron a 30°C/ 24-30 h y se registraron los halos
de inhibición del crecimiento de las BANH, causado por los
microorganismos antagonistas nativos del filoplano de los
cítricos.

V. Efecto de los microorganismos antagonistas sobre
los ecotipos de BANH en las hojas de
cítricos.

Para este experimento se prepararon suspensiones de las
BANH a una concentración de 1 x 107 y de los
antagonistas 1 x 107 UFC/mL en un amortiguador de
fosfatos 0.1M a pH 7.0. De ambas suspensiones se tomaron
con pipetas Pasteur 18 gotas/hoja, cada gota equivalente a
100µl de 1 x 103 UFC, que se aplicaron sobre la
superficie de hojas sanas de: naranjo dulce, naranjo agrio,
mandarino y limón de acuerdo con la técnica de
Hirano et al. (1985) y Donegan et al. (1991) luego
se continuó con el procedimiento que se describió
en el inciso II.

VI. Análisis estadístico.

Para establecer las diferencias de la actividad de la
inhibición de los microorganismos antagonistas nativos de
las hojas de cítricos sobre los ecotipos de las BANH de
P. agglomerans y P. syringae se aplicó la
prueba de Chi cuadrada (X2) y para validar la
inhibición de estos antagonistas sobre la frecuencia de
formación de núcleos de hielo, se empleó un
diseño
de bloques al azar con 34 tratamientos y 7 repeticiones (Steel y
Torrie, 1985).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

I. Aislamiento de microorganismos antagonistas a los
ecotipos de BANH

En el AA se detectaron bacterias antagonistas que
causaron halos de inhibición del crecimiento de los
ecotipos de P. agglomerans y de P. syringae, (Psst
y PssCB728a), lo que sugiere que estos antagonistas liberaron
sustancias tipo antibiótico aún no identificadas
(Wilson y Lindow, 1983, 1987,1994b, 1994c, 1995; Lindow, 1983b,
1987). En el cuadro 1 se presenta el efecto de esos antagonistas
sobre los ecotipos de P. agglomerans aislados de hojas de
naranjo dulce (NI), el cual fue similar al que se detectó
sobre las cepas y ecotipos de P. syringae, (Psst y
PssCB728a). De acuerdo con el tamaño de la muestra se
encontraron diferencias en el grado de competencia entre los
antagonistas y su capacidad para inhibir el crecimiento de los
ecotipos de las BANH: P. agglomerans y P. syringae,
(Psst y PssCB728a) en el AA.

Estos resultados concuerdan con los reportados por
Anderson et al. (1984); Cody et al. (1987) y
Granados et al. (2000), quienes observaron diferencias en
la actividad de los antagonistas, provenientes de diversas
plantas, sobre el grado de inhibición del crecimiento de
los ecotipos de las BANH, en medio de cultivo artificial. En
estos trabajos se reporta que los antagonistas muestran mayor
capacidad de inhibición bajo condiciones in vitro;
mientras que en otros reportes de investigación en los cuales se
intentó reducir el daño de las BANH con
microorganismos antagonistas, en árboles
frutales la inhibición fue menor Anderson et al.
(1984) y Hirano et al. (1996).

El cuadro 2 presenta el efecto de los antagonistas del
filoplano de cítricos sobre los ecotipos de P.
agglomerans (L-1 y N-1) y de P. syringae. En este
ensayo se encontró que excepto los géneros
Escherichia y Klebsiella, las bacterias Gram negativas
fueron antagonistas en diverso grado contra la población
de las BANH. Confirma que el comportamiento
de cada bacteria es dependiente del tipo y de la condición
del medio de cultivo artificial.

Estos resultados difieren de los resultados que se
observa en la superficie de la hoja en el campo. En el medio de
cultivo los microorganismos antagónicos inhibieron a las
BANH, lo cual se presume está asociado a la riqueza
nutricional del AA, ya que los microorganismos no mostraron un
efecto de inhibición similar sobre la población de
las BANH en la hoja del cítrico, en donde probablemente la
concentración y tipo de los exudados foliares no
estimularon a las bacterias antagonistas y consecuentemente se
redujo su impacto sobre la población de las BANH (Cody
et al. 1987; Blakeman, 1993). Por otra parte los dos
géneros Gram positivos Bacillus y
Micrococcus fueron antagónicos para uno de los
ecotipos de las BANH de P. syringae y/o P.
agglomerans.

Es probable que su capacidad de inhibición contra
la población BANH se relacione con su tolerancia a la
radiación
solar, pues se sabe que Micrococcus sintetiza un pigmento
que le protege del efecto bactericida de la luz ultravioleta.
En tanto que por la naturaleza de
las esporas de Bacillus, estas son resistentes no solo a
este factor físico, sino también a agentes
químicos. Incluso en el caso de Bacillus,
está reportado que utiliza los exudados foliares para
colonizar y dominar esa zona de la planta, lo que explica su
efecto de inhibición contra la población de las
BANH y en consecuencia la reducción del daño por
congelamiento sobre la hoja (Beattie y Lindow,
1994ab).

II. Efecto de los microorganismos antagonistas sobre
los ecotipos de las BANH en las hojas de
cítricos

El cuadro 3 resume el análisis de varianza del
efecto de la inhibición de los microorganismos
antagonistas sobre el crecimiento de los ecotipos de las BANH y
sobre la frecuencia de formación de núcleos de
hielo en las hojas de cítricos. Los resultados
indican que no se detectó una diferencia significativa (p
< 0.01) en el porcentaje de reducción de la
formación de núcleos de hielo en las hojas de
naranjo dulce, agrio y mandarino.

De forma análoga a lo reportado en: perales,
manzanos y orquídeas (Gross et al., 1984; Donegan
et al., 1991). No se observó efecto de los
microorganismos antagonistas sobre la población de las
BANH en la hoja de limón, probablemente por la incapacidad
de los antagonistas para colonizar este tipo de hoja.
También es probable que la población BANH fue
más competitiva que la de los microorganismos
antagonistas, por los exudados foliares del limón y en
consecuencia se observó la muerte de
la hoja por congelamiento (Beattie y Lindow, 1994 a, b,
c).

Resultados semejantes se reportaron por Lindow (1981) y
Gross et al. (1984), en hojas de árboles de manzano
y de peral. En otros casos la inhibición de la frecuencia
de nucleación fue de un 100%, como se señala en
hojas de árboles frutales por Hirano et al. (1985,
1996). Lo anterior sugiere que en este grupo de
microorganismos antagonistas nativos, existe el potencial para su
aplicación, en la reducción del efecto negativo de
los ecotipos de las BANH (Granados et al.,
2000).

III. Caracterización bioquímica de los
principales microorganismos antagonistas a los ecotipos de
BANH

En el Cuadro 4 se presentan las pruebas
bioquímicas que señalan que las bacterias
antagonistas a los ecotipos de las BANH pertenecen a la familia de
las enterobacterias (Buchanan y Gibson, 1994). Se identificaron
tres géneros típicos Escherichia coli,
Enterobacter spp. y Klebsiella sp; en general estas
bacterias se reportan en el filoplano, solo cuando aguas negras
mediante aerosoles las contaminan. Recientes investigaciones
sugieren que en realidad estas bacterias son ubicuas (Costa y
Loper, 1995; Barraquillo et al., 1997; Estrada-De los
Santos et al., 2001).

La estrecha relación de estas bacterias
antagonistas de las BANH con enfermedades
gastrointestinales, limitan su posible aplicación para
evitar el daño por congelamiento en hojas de las BANH
(Lindow et al.,1993; Yessad et al., 1994). El
género
Bacillus sp. como se señaló previamente,
tiene potencial para reducir el daño por congelamiento
contra los ecotipos de las BANH, pues está demostrado que
B. cereus coloniza y domina las hojas de plantas al
utilizar probablemente sus exudados como fuente de carbono y
energía (Lambert y Perferoen, 1992 y Beattie y
Lindow, 1994a,b) y de esa forma impide el establecimiento de
bacterias fitopatógenas de la hoja. Se cree que de esa
forma Bacillus sp. probablemente evitó el
daño por congelamiento en la hoja del cítrico, por
los ecotipos de las BANH (Cody et al. 1987; Donegan et
al. 1991; Hirano et al. 1996 Wilson et al.
1999).

La detección de inhibición del
congelamiento en las hojas por una levadura no es usual, requiere
de investigación para determinar su posible uso potencial
contra el daño por congelamiento por la población
de las BANH. En el caso de M. luteus este coco fue
antagónico para ciertos ecotipos de la población
BANH. Se supone que ello se debe en parte a que sintetiza un
pigmento intracelular que lo protege de la acción
bactericida de la radiación solar y la luz ultravioleta
(Buchanan y Gibson, 1994). Los resultados de este trabajo
sugieren que no todos los microorganismos antagonistas a las BANH
de esta clase compiten
por el espacio y los exudados del filoplano, como lo reportan
Donegan et al. (1991) y Granados et al. (2000), ya
que en algunos ensayos de
antagonismo microbiano contra la población de las BANH
para la reducción del daño por congelamiento en las
hojas de cítricos, fue apenas de un 15%. Como lo reportado
por Cody et al. (1987); Lindemann y Suslow (1987); Wilson
y Lindow (1995) y Wilson et al. (1999) en hojas de
árboles frutales, lo que indica que este no es un problema
de fácil solución.

Los resultados de esta investigación apoyan la
existencia natural de una amplia gama de microorganismos nativos
del filoplano, de aplicación potencial antagonistas contra
a los ecotipos de las BANH, como lo reportan Lindow y Connel
(1984); Wilson y Lindow (1992; 1994a) y Yessad et al.
(1994). Los ensayos realizados con estos microorganismos
antagonistas contra ecotipos de población de las BANH,
facilita la selección
de aquellos con características adecuadas para su
aplicación en ambientes agrícolas que sean inocuos
a plantas, animales y
humanos, de fácil cultivo en el laboratorio y de bajo
costo de
producción.

La aplicación de bacterias antagonistas nativas
de hojas sanas, tiene ventajas sobre los microorganismos de los
productos
comerciales conocidos, ya que estos en algunos casos se basan en
bacterias mutantes modificadas por ingeniería
genética como: P. syringae
(Lindow, 1987; Weibell et al., 1990; Varvaro y
Martella, 1993; Wilson y Lindow, 1993, 1994b). No obstante la
eficacia de estas mutantes para reducir el daño por
congelamiento de las BANH en las plantas, su aplicación
supone un riesgo, el cual
aún no se sabe que tan grave puede ser por la falta de
conocimiento
sobre su posible impacto negativo al ambiente al dispersar estas
bacterias en la naturaleza. Por ello se recomienda
investigación al respecto en el agroecosistema para
prevenir consecuencias indeseables (Lindeman y Suslow, 1987;
Sunding y Bender, 1993; Wilson y Lindow, 1994 a, b, c). Se
concluye que los microorganismos nativos antagonistas de las BANH
pueden ser una opción para reducir su actividad
detrimental, como se observa en la naturaleza.

AGRADECIMIENTOS

Este trabajo se dedica al Dr. Luis J. Galán-Wong,
FCB-UANL quien sugirió trabajar con esta idea.

A la dirección general de Investigación Científica y Tecnología de la SEP
a través de la FCB-UANL, por el apoyo económico. A
la CIC de la UMSNH proyecto 2.7,
(2002-2004) por las facilidades para su publicación. A la
Dra. Lidia Solís del Lab. Fitopatología de la
FCB-UANL por las facilidades logística y valioso tiempo, al MC Pedro
Moreno-Zacarías por su asesoría en el
análisis estadístico. A Beatriz Noriega-Gamboa por
su paciencia en su escritura.

LITERATURA CITADA

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Cuadro 1. Efecto de microorganismos antagonistas de
cítricos a una bacteria activadora de núcleos de
hielo en el laboratorio.

xxOrigen del ecotipo: naranja
dulce NI.

x2 =5.8 N.S. p>0.05G1=4

Cuadro 2. Inhibición de los ecotipos de
bacterias activadores de núcleos de hielo por
microorganismos antagonistas del filoplano de
cítricos.

ahojas sanas de limón (L)
y naranjo (N) bcepas de referencias. Lindow, U. de
California, Berkeely, USA. (-) sin inhibición (+)
inhibido.

Cuadro 3. Análisis de
varianza del efecto de microorganismos antagonistas sobre la
reducción del daño por congelamiento causado por
BANHa en hojas sanas de
cítricos.

**P<0.05, *P< 0.01,
aBANH= Bacterias activadoras de núcleos de
hielo: P. agglomerans, Pseudomonas syringae. *
diferencia estadística. ** diferencia no
significativa.

Cuadro 4. Caracterización
bioquímica de las bacterias antagonistas de
cítricos a los ecotipos de BANH: Pantoae
agglomerans y Pseudomonas syringae .

*EMB= Agar Eosima azul de metileno para
entéricas. Las pruebas bioquímicas se realizaron
por triplicado, reacción: (-) = Negativo; (+) = Positiva.
BANH= bacterias activadoras de núcleo de hielo 1 Psst y
PssCBT28a.

1López-Granados, G;

2Fernández-Pavía,
S..

3*Sánchez-Yáñez,
J.M.

1Facultad de Ciencias
Biológicas. Universidad Autónoma de Nuevo
León. Apdo. Postal 414, San Nicolás de los Garza,
N.L.

2Instituto de Investigaciones Agropecuarias y
Forestales. Universidad Michoacana de San Nicolás de
Hidalgo.Ave. Acueducto y Tzintzuntzan s/n. Morelia,
Michoacán, 58240, México.

3Microbiología ambiental, Instituto de
Investigaciones Químico Biológicas. Universidad
Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Edif. B-1, C.U.
58000. Morelia, Michoacán, México

*autor correspondiente