Introducción a la técnica histológica

Resumen

Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica. La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo microscopia óptica o electrónica.

Los procedimientos de la Técnica Histológica se resumen en las etapas siguientes:

Para empezar con la técnica histológica se debe obtener una MUESTRA DEL TEJIDO a estudiar y existen 2 formas:

• Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.

• Biopsia:(del griego bios = vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado, por punción y absorción, por raspado, por trepanación.

Fijación

Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienen varias finalidades:

• 1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.

• 2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.

• 3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.

• 4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.

Esto se logra al inactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.

La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.

Los agentes más usados para Microscopia de Luz son:

Formaldehído al 5%, Formol al 10% o Formalina (Solución de Formaldehído especial)

• Puede usarse con amortiguadores o con otros fijadores.

• Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales y conservando las estructuras de la célula.

• Es el más usado es el Formol al 10%.

Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquido de Helly y Fijador de Bouin

• Funcionan formando enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las estructuras de la célula.

• El fijador de Bouin es una solución que contiene 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.

• El líquido de Helly es una solución con 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5 ml de formol.

Cloruro de Mercurio y Ácido Picrico

• Precipitan las proteínas.

Para Microscopia Electrónica se usan:

Glutaraldehído al 2.5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y Permanganato de Potasio

• Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el formaldehído, son muy enérgicos en su acción con las proteínas.

• Actúan como colorantes electrodensos, permitiendo observar al tejido con el haz de electrones.

• Una solución de Glutaraldehído al 2.5% en un tampón a pH 7.4, evita la violenta desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más usado en Microscopia Electrónica.

Regla de Oro para la Fijación

• La mejor fijación es cuando a pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la fijación.

• Tamaño de la Muestra

• El tamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm. variando el estudio para lo cual de va a utilizar.

Deshidratación

Después que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se deshidrata.

Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a mayor de agente deshidratante, por ejemplo, Alcohol Etílico o Acetona. Iniciando con alcohol al 50 %, luego con una solución de 60%, 70%, 80%, 90%, 96% y alcanzando de manera paulatina el alcohol al 100 % para eliminar el agua. Esto se hace por que si se colocara el tejido en una solución al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy rápido del tejido y se deformaría.